大肠杆菌基因密码锁的设计
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| ·微生物菌种安全与保护策略 | 第13-16页 |
| ·物理防护 | 第13-14页 |
| ·构建毒素-抗毒素系统 | 第14页 |
| ·构建缺陷型菌株 | 第14-15页 |
| ·构建基因线路 | 第15-16页 |
| ·细胞生长的调控机制 | 第16-22页 |
| ·细胞分裂机制 | 第16-18页 |
| ·必需基因表达调控 | 第18-20页 |
| ·细胞程序化死亡 | 第20-22页 |
| ·外界环境的调控 | 第22页 |
| ·基因密码锁的应用 | 第22-23页 |
| ·工业生产 | 第22页 |
| ·生物安全 | 第22-23页 |
| ·知识产权保护 | 第23页 |
| ·论文选题依据及研究内容 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·药品和试剂 | 第25-27页 |
| ·仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·菌体培养 | 第28-29页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30-32页 |
| ·3A-Assembly及酶切体系与连接体系 | 第32-33页 |
| ·酶切产物与PCR产物回收 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与热激法转化 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌电击转化 | 第35页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第35-36页 |
| ·一步法定点突变 | 第36页 |
| ·标准元件的构建 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌恒定温度培养 | 第37页 |
| ·涂布平板法活菌数的测定 | 第37页 |
| ·荧光显微镜检测方法 | 第37页 |
| ·流式细胞仪荧光强度检测方法 | 第37页 |
| ·丙酮酸激酶活性检测方法 | 第37-38页 |
| ·苹果酸脱氢酶活性检测方法 | 第38-39页 |
| 第3章 细胞分裂调控基因线路的设计与应用 | 第39-51页 |
| 引言 | 第39页 |
| ·细胞分裂调控基因的功能分析 | 第39-45页 |
| ·细胞分裂调控基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·单基因表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·多基因表达质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·细胞分裂调控基因的功能验证 | 第43-45页 |
| ·细胞分裂调控基因线路的组装与验证 | 第45-50页 |
| ·细胞分裂调控基因线路的设计 | 第45-46页 |
| ·细胞分裂调控基因线路的组装与转化 | 第46-47页 |
| ·细胞分裂调控基因线路的功能验证 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第4章 必需基因调控线路的设计与应用 | 第51-67页 |
| 引言 | 第51页 |
| ·必需基因调控线路的设计 | 第51-55页 |
| ·必需基因hemD的克隆 | 第51-52页 |
| ·必需基因敲除菌株 ΔhemD的验证 | 第52-54页 |
| ·必需基因调控线路的设计 | 第54-55页 |
| ·必需基因调控线路的组装与验证 | 第55-65页 |
| ·单层基因线路的构建 | 第55-58页 |
| ·单层基因线路的验证 | 第58-60页 |
| ·双层“与”门基因线路的构建 | 第60-63页 |
| ·双层“与”门基因线路的验证 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 作者简介 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
