白塞病新自身抗原的筛选与应用
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 缩写清单 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-14页 |
| 2 文献综述 | 第14-27页 |
| ·环境因素与自身免疫疾病 | 第14-15页 |
| ·白塞病 | 第15-20页 |
| ·诊断标准 | 第16-18页 |
| ·发病机制 | 第18-20页 |
| ·治疗方案 | 第20页 |
| ·抗原筛选的方法 | 第20-26页 |
| ·分子文库 | 第20-21页 |
| ·免疫沉淀 | 第21-22页 |
| ·蛋白质芯片 | 第22-24页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·质谱 | 第25-26页 |
| ·研究内容与意义 | 第26-27页 |
| 3 实验材料与方法 | 第27-50页 |
| ·实验试剂 | 第27-29页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂配制 | 第30-34页 |
| ·实验方法 | 第34-50页 |
| ·细胞培养 | 第34-36页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第36页 |
| ·细胞回收及总蛋白质的定量 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37-38页 |
| ·Western blot | 第38-39页 |
| ·免疫沉淀 | 第39页 |
| ·MALDI-TOF/TOF MS | 第39-40页 |
| ·细胞总RNA提取与cDNA制备 | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的克隆、表达和纯化 | 第41-46页 |
| ·2-DE | 第46-47页 |
| ·芯片印迹 | 第47-49页 |
| ·ELISA | 第49页 |
| ·数据分析 | 第49-50页 |
| 4 靶细胞的筛选 | 第50-59页 |
| ·血清孵育条件的优化 | 第50-51页 |
| ·细胞间接免疫荧光检测 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-58页 |
| ·血清孵育条件优化的结果 | 第51-52页 |
| ·HUVEC间接免疫荧光检测的结果 | 第52-53页 |
| ·HaCaT间接免疫荧光检测的结果 | 第53-54页 |
| ·HEK293间接免疫荧光检测的结果 | 第54-55页 |
| ·HepG2间接免疫荧光检测的结果 | 第55-56页 |
| ·HeLa间接免疫荧光检测的结果 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 5 靶抗原的筛选 | 第59-69页 |
| ·细胞ELISA | 第59-60页 |
| ·Western blot筛选条件的优化 | 第60页 |
| ·Western blot筛选靶抗原 | 第60页 |
| ·免疫沉淀验证 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-67页 |
| ·细胞ELISA的结果 | 第60-61页 |
| ·Western blot膜优化的结果 | 第61-62页 |
| ·Western blot血清稀释比优化的结果 | 第62-63页 |
| ·Western blot筛选靶抗原的结果 | 第63-66页 |
| ·免疫沉淀验证的结果 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 6 目的蛋白的鉴定及克隆表达 | 第69-82页 |
| ·目的蛋白的鉴定 | 第69页 |
| ·目的蛋白的制备 | 第69-70页 |
| ·目的蛋白的活性验证 | 第70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-80页 |
| ·MALDI-TOF/TOF MS鉴定的结果 | 第70-73页 |
| ·NCBI检索目的蛋白信息 | 第73-75页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第75页 |
| ·双酶切产物连接及验证 | 第75-76页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第76-80页 |
| ·重组Prohibitin的活性验证结果 | 第80页 |
| ·小结 | 第80-82页 |
| 7 IPM检测平台在BD中的应用 | 第82-96页 |
| ·HUVEC细胞IPM的制备与应用 | 第83页 |
| ·目的蛋白的鉴定与制备 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-95页 |
| ·2-DE及芯片印迹 | 第83-85页 |
| ·IPM血清检测及质谱鉴定的结果 | 第85-90页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第90-94页 |
| ·重组β-tubulin的活性验证结果 | 第94-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 8 靶抗原在BD中的抗体阳性率测定 | 第96-107页 |
| ·抗Prohibitin抗体的ELISA检测 | 第96页 |
| ·抗β-tubulin抗体的ELISA检测 | 第96页 |
| ·与抗热激蛋白抗体的相关性分析 | 第96-97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-106页 |
| ·抗Prohibitin抗体在BD中的血清分布 | 第97-99页 |
| ·抗β-tubulin抗体在BD中的血清分布 | 第99-102页 |
| ·与抗热激蛋白抗体的相关性分析结果 | 第102-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 9 结论 | 第107-109页 |
| ·结论 | 第107-108页 |
| ·创新点 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 附录A | 第122-126页 |
| 附录B | 第126-129页 |
| 作者简历及在学研究成果 | 第129-133页 |
| 学位论文数据集 | 第133页 |
