| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| ·纤维素 | 第13-14页 |
| ·纤维素资源及其分子结构 | 第13-14页 |
| ·纤维素的降解及其影响因素 | 第14页 |
| ·纤维素酶 | 第14-20页 |
| ·纤维素酶的组成及结构 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的合成与调控 | 第17页 |
| ·产纤维素酶的主要微生物 | 第17-18页 |
| ·产纤维素酶菌株的筛选 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶在各个领域的应用 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶基因的克隆与表达 | 第20-23页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·青霉纤维素酶基因的克隆 | 第21页 |
| ·草酸青霉纤维素酶基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第22-23页 |
| ·研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·研究路线 | 第24-25页 |
| 2 实验材料与方法 | 第25-43页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·培养基及配制 | 第25-26页 |
| ·主要试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第26-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第28-29页 |
| ·引物合成 | 第29页 |
| ·纤维素降解菌的筛选 | 第29-34页 |
| ·纤维素降解菌的富集培养 | 第29-30页 |
| ·纤维素降解菌的初筛 | 第30页 |
| ·纤维素降解菌的复筛 | 第30-31页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第31页 |
| ·滤纸酶活测定方法 | 第31页 |
| ·内切葡聚糖酶活测定方法 | 第31-32页 |
| ·木聚糖酶活测定方法 | 第32-33页 |
| ·外切葡聚糖酶活测定方法 | 第33页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活测定方法 | 第33-34页 |
| ·纤维素降解菌的鉴定 | 第34-36页 |
| ·菌株形态观察 | 第34页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第34页 |
| ·核糖体-DNA 的ITS 序列扩增 | 第34页 |
| ·DNA 片段的回收和连接 | 第34-35页 |
| ·克隆载体的转化和测序 | 第35-36页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆与表达及酶学性质分析 | 第36-39页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第36页 |
| ·内切葡聚糖酶重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·内切葡聚糖酶重组质粒的转化和筛选 | 第37页 |
| ·内切葡聚糖酶重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE 分析 | 第37-38页 |
| ·重组内切葡聚糖酶酶学性质分析 | 第38-39页 |
| ·外切葡聚糖酶基因的克隆与表达及酶学性质分析 | 第39-43页 |
| ·外切葡聚糖酶基因保守片段的克隆 | 第39页 |
| ·TAIL-PCR 方法扩增外切葡聚糖酶基因侧翼序列 | 第39-40页 |
| ·外切葡聚糖酶基因全长扩增与分析 | 第40页 |
| ·外切葡聚糖酶重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·外切葡聚糖酶重组质粒的转化和筛选 | 第41页 |
| ·外切葡聚糖酶重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE 分析 | 第41页 |
| ·重组外切葡聚糖酶酶学性质分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-61页 |
| ·纤维素降解菌的筛选 | 第43-49页 |
| ·纤维素降解菌初筛 | 第43页 |
| ·纤维素降解菌复筛 | 第43页 |
| ·蛋白质标准曲线测定 | 第43页 |
| ·滤纸酶活测定 | 第43-44页 |
| ·内切葡聚糖酶活测定方法 | 第44-45页 |
| ·木聚糖酶活测定方法 | 第45-46页 |
| ·外切葡聚糖酶活测定方法 | 第46-48页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活测定方法 | 第48-49页 |
| ·纤维素降解菌的鉴定 | 第49-51页 |
| ·M 菌株形态观察 | 第49-50页 |
| ·核糖体-DNA ITS 序列的分析 | 第50-51页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆与表达 | 第51-53页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的序列分析 | 第51-53页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的蛋白结构预测 | 第53页 |
| ·内切葡聚糖酶重组蛋白的诱导表达和SDS-PAGE 分析 | 第53页 |
| ·重组内切葡聚糖酶酶学性质分析 | 第53-55页 |
| ·pH 对重组酶活性的影响 | 第53-54页 |
| ·温度对重组酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·金属离子及其他试剂对重组酶活性的影响 | 第55页 |
| ·外切葡聚糖酶基因的克隆与表达 | 第55-58页 |
| ·外切葡聚糖酶全长基因克隆 | 第55-56页 |
| ·外切葡聚糖酶基因序列分析 | 第56页 |
| ·外切葡聚糖酶蛋白结构预测 | 第56-58页 |
| ·外切葡聚糖酶重组蛋白的诱导表达和SDS-PAGE 分析 | 第58页 |
| ·重组外切葡聚糖酶酶学特性分析 | 第58-61页 |
| ·pH 对重组酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·温度对重组酶活性的影响 | 第59页 |
| ·金属离子及其他试剂对重组酶活性的影响 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| ·草酸青霉M 菌株的降解能力 | 第61页 |
| ·重组内切葡聚糖酶分析 | 第61-62页 |
| ·重组外切葡聚糖酶分析 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
