| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·研究的目的及意义 | 第10-11页 |
| ·文献综述 | 第11-18页 |
| ·乳糖酶的应用及研究进展 | 第11-14页 |
| ·酵母表达系统研究进展 | 第14-18页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·菌株及质粒 | 第19页 |
| ·常用试剂及酶类 | 第19页 |
| ·常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·菌株的培养和菌种保存 | 第21页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·基因的扩增 | 第22-26页 |
| ·载体的构建 | 第26页 |
| ·脆壁克鲁维酵母感受态的制备 | 第26-27页 |
| ·脆壁克鲁维酵母筛选剂及压力的选择 | 第27页 |
| ·脆壁克鲁维酵母电击转化及条件摸索 | 第27页 |
| ·脆壁克鲁维酵母转化子的PCR 检测 | 第27-28页 |
| ·重组菌株乳糖酶活性测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-50页 |
| ·载体构建 | 第30-38页 |
| ·目的片段Plac 的克隆 | 第30-33页 |
| ·重组质粒pPkan 的构建 | 第33-35页 |
| ·重组质粒pTUASR 的构建 | 第35-38页 |
| ·脆壁克鲁维酵母的转化 | 第38-49页 |
| ·脆壁克鲁维酵母筛选剂及筛选剂压力的选择 | 第38-39页 |
| ·脆壁克鲁维酵母电击转化条件的优化 | 第39-44页 |
| ·脆壁克鲁维酵母K.f.-kan 转化子的筛选 | 第44-46页 |
| ·脆壁克鲁维酵母K.f.-UASR 转化子的筛选 | 第46-49页 |
| ·乳糖酶酶活测定 | 第49-50页 |
| ·重组酵母菌株乳糖酶的诱导表达 | 第49页 |
| ·重组酵母菌株乳糖酶活性的测定 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·初始菌株的选择 | 第50-51页 |
| ·脆壁克鲁维酵母抗性标记基因及筛选压力的选择 | 第51页 |
| ·影响同源重组率的因素 | 第51页 |
| ·上游激活序列重复方式的选择 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| ·PLac 目的片段和 UASR 重复片段的克隆 | 第53页 |
| ·脆壁克鲁维酵母 kan 抗性标记载体的构建 | 第53页 |
| ·脆壁克鲁维酵母表达载体 K.f.-UASR 的构建 | 第53页 |
| ·酵母的转化及转化子的筛选、表达 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |