符号说明 | 第1-12页 |
中文摘要 | 第12-14页 |
Abstract | 第14-17页 |
1 前言 | 第17-38页 |
·微生物表面展示系统及其应用 | 第17-23页 |
·噬菌体表面展示 | 第17页 |
·细菌表面展示 | 第17-18页 |
·酵母表面展示 | 第18-20页 |
·酵母表面展示系统的应用 | 第20-23页 |
·鸡球虫病及其免疫防治研究进展 | 第23-32页 |
·鸡球虫的生活史 | 第24-25页 |
·鸡球虫的免疫原性 | 第25页 |
·鸡球虫免疫机制 | 第25-28页 |
·鸡球虫疫苗 | 第28-31页 |
·E.tenella 微线蛋白的研究进展 | 第31-32页 |
·酵母蛋白质组学的研究进展 | 第32-36页 |
·蛋白质组学概论 | 第32-33页 |
·蛋白质组学应用于酵母细胞壁蛋白的研究 | 第33-36页 |
·本研究的目的意义 | 第36-38页 |
2 材料与方法 | 第38-61页 |
·试验材料 | 第38-39页 |
·试验菌株与载体 | 第38页 |
·试验动物与虫株 | 第38页 |
·主要试剂及试剂盒 | 第38页 |
·主要仪器 | 第38-39页 |
·溶液配制 | 第39页 |
·试验方法 | 第39-61页 |
·引物的设计与合成 | 第39页 |
·柔嫩艾美尔球虫总 RNA 的提取 | 第39-41页 |
·cDNA 的合成 | 第41页 |
·酵母基因组的提取 | 第41-42页 |
·酵母表面展示质粒 pYSD 的构建 | 第42-46页 |
·EGFP/EtMIC2 表面展示质粒的构建 | 第46页 |
·EBY100 基因组 AGA2 基因敲除质粒的构建 | 第46-47页 |
·酿酒酵母的转化 | 第47-48页 |
·重组子的鉴定 | 第48页 |
·EGFP 的表面展示 | 第48页 |
·EtMic2 的表面展示 | 第48-49页 |
·流式细胞仪分析 EGFP/EtMic2 的表面定位 | 第49页 |
·生长曲线的测定 | 第49页 |
·E. tenella 的复壮 | 第49页 |
·动物试验设计与免疫程序 | 第49-50页 |
·增重效果的检测 | 第50页 |
·盲肠病变计分 | 第50页 |
·克粪便卵囊数(OPG) | 第50-51页 |
·血清和粘膜抗体检测 | 第51页 |
·鸡淋巴细胞的分离 | 第51页 |
·T 淋巴细胞增殖试验 | 第51-52页 |
·T 淋巴细胞亚群检测 | 第52页 |
·细胞因子的检测 | 第52页 |
·酵母细胞的培养 | 第52页 |
·酵母细胞壁蛋白的提取 | 第52-54页 |
·蛋白样品的纯化 | 第54-55页 |
·蛋白定量 | 第55页 |
·等电聚焦 | 第55-56页 |
·胶条平衡 | 第56页 |
·第二向 SDS-PAGE 电泳 | 第56-57页 |
·凝胶染色 | 第57-58页 |
·凝胶扫描和图像分析 | 第58页 |
·蛋白质质谱鉴定 | 第58-59页 |
·数据库检索 | 第59-60页 |
·数据分析 | 第60-61页 |
3 试验结果 | 第61-87页 |
·新型酿酒酵母表面展示系统的构建 | 第61-69页 |
·酵母表面展示质粒 pYSD 的构建结果 | 第61-62页 |
·EGFP 的表面展示结果 | 第62-65页 |
·EtMic2 的表面展示结果 | 第65-67页 |
·EBY100 基因组 Aga2p 对外源蛋白的展示无影响 | 第67-68页 |
·外源蛋白的展示对酵母细胞的生长无影响 | 第68-69页 |
·EtMic2 口服酵母疫苗的制备及其免疫保护效果的评价 | 第69-76页 |
·EtMic2 的 Western Blot 鉴定结果 | 第69-70页 |
·HAO/pYSD-EtMIC2 的免疫保护效果的评价 | 第70-72页 |
·血清 EtMic2 和粘膜 sIgA 抗体水平检测结果 | 第72-73页 |
·外周血 T 淋巴细胞增殖结果 | 第73-74页 |
·CD4+和 CD8+T 淋巴细胞亚群的检测结果 | 第74-75页 |
·细胞因子 IFN-γ和 IL-18 的检测结果 | 第75-76页 |
·EtMic2 的展示对酵母细胞壁蛋白的影响 | 第76-87页 |
·细胞壁蛋白浓度检测结果 | 第76-77页 |
·细胞壁蛋白 SDS-PAGE 电泳结果 | 第77-78页 |
·细胞壁蛋白双向电泳结果 | 第78-80页 |
·差异蛋白点的质谱鉴定结果 | 第80-81页 |
·蛋白质生物学信息分析 | 第81页 |
·单个差异蛋白点的分析 | 第81-87页 |
4 讨论 | 第87-94页 |
·新型酿酒酵母表面展示系统的构建 | 第87-89页 |
·EtMic2 口服酵母疫苗的制备及其免疫保护效果的评价 | 第89-91页 |
·EtMic2 的展示对酵母细胞壁蛋白的影响 | 第91-94页 |
5 结论 | 第94-95页 |
参考文献 | 第95-112页 |
附录 | 第112-115页 |
致谢 | 第115-116页 |
博士在读期间发表的论文 | 第116页 |