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新型酿酒酵母表面展示系统的构建及鸡球虫EtMic2活载体疫苗的免疫保护性研究

符号说明第1-12页
中文摘要第12-14页
Abstract第14-17页
1 前言第17-38页
   ·微生物表面展示系统及其应用第17-23页
     ·噬菌体表面展示第17页
     ·细菌表面展示第17-18页
     ·酵母表面展示第18-20页
     ·酵母表面展示系统的应用第20-23页
   ·鸡球虫病及其免疫防治研究进展第23-32页
     ·鸡球虫的生活史第24-25页
     ·鸡球虫的免疫原性第25页
     ·鸡球虫免疫机制第25-28页
     ·鸡球虫疫苗第28-31页
     ·E.tenella 微线蛋白的研究进展第31-32页
   ·酵母蛋白质组学的研究进展第32-36页
     ·蛋白质组学概论第32-33页
     ·蛋白质组学应用于酵母细胞壁蛋白的研究第33-36页
   ·本研究的目的意义第36-38页
2 材料与方法第38-61页
   ·试验材料第38-39页
     ·试验菌株与载体第38页
     ·试验动物与虫株第38页
     ·主要试剂及试剂盒第38页
     ·主要仪器第38-39页
     ·溶液配制第39页
   ·试验方法第39-61页
     ·引物的设计与合成第39页
     ·柔嫩艾美尔球虫总 RNA 的提取第39-41页
     ·cDNA 的合成第41页
     ·酵母基因组的提取第41-42页
     ·酵母表面展示质粒 pYSD 的构建第42-46页
     ·EGFP/EtMIC2 表面展示质粒的构建第46页
     ·EBY100 基因组 AGA2 基因敲除质粒的构建第46-47页
     ·酿酒酵母的转化第47-48页
     ·重组子的鉴定第48页
     ·EGFP 的表面展示第48页
     ·EtMic2 的表面展示第48-49页
     ·流式细胞仪分析 EGFP/EtMic2 的表面定位第49页
     ·生长曲线的测定第49页
     ·E. tenella 的复壮第49页
     ·动物试验设计与免疫程序第49-50页
     ·增重效果的检测第50页
     ·盲肠病变计分第50页
     ·克粪便卵囊数(OPG)第50-51页
     ·血清和粘膜抗体检测第51页
     ·鸡淋巴细胞的分离第51页
     ·T 淋巴细胞增殖试验第51-52页
     ·T 淋巴细胞亚群检测第52页
     ·细胞因子的检测第52页
     ·酵母细胞的培养第52页
     ·酵母细胞壁蛋白的提取第52-54页
     ·蛋白样品的纯化第54-55页
     ·蛋白定量第55页
     ·等电聚焦第55-56页
     ·胶条平衡第56页
     ·第二向 SDS-PAGE 电泳第56-57页
     ·凝胶染色第57-58页
     ·凝胶扫描和图像分析第58页
     ·蛋白质质谱鉴定第58-59页
     ·数据库检索第59-60页
     ·数据分析第60-61页
3 试验结果第61-87页
   ·新型酿酒酵母表面展示系统的构建第61-69页
     ·酵母表面展示质粒 pYSD 的构建结果第61-62页
     ·EGFP 的表面展示结果第62-65页
     ·EtMic2 的表面展示结果第65-67页
     ·EBY100 基因组 Aga2p 对外源蛋白的展示无影响第67-68页
     ·外源蛋白的展示对酵母细胞的生长无影响第68-69页
   ·EtMic2 口服酵母疫苗的制备及其免疫保护效果的评价第69-76页
     ·EtMic2 的 Western Blot 鉴定结果第69-70页
     ·HAO/pYSD-EtMIC2 的免疫保护效果的评价第70-72页
     ·血清 EtMic2 和粘膜 sIgA 抗体水平检测结果第72-73页
     ·外周血 T 淋巴细胞增殖结果第73-74页
     ·CD4+和 CD8+T 淋巴细胞亚群的检测结果第74-75页
     ·细胞因子 IFN-γ和 IL-18 的检测结果第75-76页
   ·EtMic2 的展示对酵母细胞壁蛋白的影响第76-87页
     ·细胞壁蛋白浓度检测结果第76-77页
     ·细胞壁蛋白 SDS-PAGE 电泳结果第77-78页
     ·细胞壁蛋白双向电泳结果第78-80页
     ·差异蛋白点的质谱鉴定结果第80-81页
     ·蛋白质生物学信息分析第81页
     ·单个差异蛋白点的分析第81-87页
4 讨论第87-94页
   ·新型酿酒酵母表面展示系统的构建第87-89页
   ·EtMic2 口服酵母疫苗的制备及其免疫保护效果的评价第89-91页
   ·EtMic2 的展示对酵母细胞壁蛋白的影响第91-94页
5 结论第94-95页
参考文献第95-112页
附录第112-115页
致谢第115-116页
博士在读期间发表的论文第116页

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