| 中文摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 1 引言 | 第20-43页 |
| ·马立克氏病（MD）的研究进展 | 第20-26页 |
| ·病原学 | 第21-22页 |
| ·流行病学 | 第22-23页 |
| ·发病机理及病理变化 | 第23-26页 |
| ·MDV 分子生物学研究进展 | 第26-31页 |
| ·MDV 基因组结构 | 第26-28页 |
| ·MDV 结构蛋白及相关基因 | 第28-30页 |
| ·MDV 的基因及相关蛋白 | 第30-31页 |
| ·DNA 片段克隆的载体系统 | 第31-36页 |
| ·质粒(plasmid) | 第31页 |
| ·粘粒 | 第31-32页 |
| ·BAC 的优势及其发展 | 第32-36页 |
| ·MD 的防制 | 第36-41页 |
| ·免疫机理 | 第36-37页 |
| ·疫苗研究进展 | 第37-38页 |
| ·目前 MDV 疫苗的种类 | 第38-41页 |
| ·常规致弱疫苗 | 第38-39页 |
| ·新型疫苗 | 第39-40页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第40-41页 |
| ·研究的目的意义 | 第41-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-85页 |
| ·材料 | 第43-49页 |
| ·常规分子克隆试剂 | 第43页 |
| ·试剂准备： | 第43-45页 |
| ·单、多克隆抗体 | 第45页 |
| ·相关表达载体 | 第45-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·相关疫苗及抗原 | 第48页 |
| ·实验动物 | 第48-49页 |
| ·相关病毒及菌种(H9N2 和 NDV) | 第49页 |
| ·常规试验操作方法 | 第49-64页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第49页 |
| ·常规 PCR | 第49-50页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第50-51页 |
| ·PCR 产物与 Vector 的连接反应 | 第51页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第51-52页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第52页 |
| ·质粒的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·AIV-H9N2 或 NDV 的鸡胚培养 | 第53页 |
| ·病毒 RNA 的提取以及反转录 | 第53-54页 |
| ·MDV 的拯救、鉴定 | 第54-55页 |
| ·MDV 的 IFA 鉴定 | 第55页 |
| ·MDV 的增殖、定量 | 第55页 |
| ·MDV 的定量 | 第55-56页 |
| ·MDV 病血的测定 | 第56页 |
| ·MDV BAC 质粒的大量制备 | 第56-57页 |
| ·MDV DNA 的提取 | 第57页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·MDV BAC 质粒的电转化 | 第58页 |
| ·重组蛋白的纯化以及 SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第58-60页 |
| ·淋巴细胞的分离以及 DNA 的提取 | 第60页 |
| ·ELISA | 第60-61页 |
| ·地高辛标记探针的合成 | 第61页 |
| ·血凝血抑试验 | 第61页 |
| ·间接免疫荧光 (IFA) | 第61-62页 |
| ·Southern blot | 第62-63页 |
| ·Western blot | 第63-64页 |
| ·实时荧光绝对定量强毒株 SDWJ1302 不同感染阶段在组织中的含量和分布 | 第64-69页 |
| ·引物设计与合成 | 第64-65页 |
| ·SDWJ1302 病毒培养 | 第65页 |
| ·病毒 DNA 提取 | 第65页 |
| ·阳性标准品的制备 | 第65页 |
| ·Ovo 基因 PCR 扩增 | 第65页 |
| ·管家基因的纯化 | 第65页 |
| ·连接与转化 | 第65页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第65页 |
| ·重组质粒的 PCR 和酶切鉴定 | 第65页 |
| ·标准品的获取与定量（紫外分光光度法） | 第65-66页 |
| ·标准曲线的制备 | 第66页 |
| ·SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 的建立 | 第66-67页 |
| ·MDV 感染试验，样品采集和 DNA 提取 | 第67页 |
| ·实时定量 PCR | 第67页 |
| ·敏感性、特异性和重复性试验 | 第67-68页 |
| ·SYBR Green q-PCR 与常规病毒血症检测方法比较灵敏度 | 第68页 |
| ·检测样品 MDVDNA 载量的定量 | 第68页 |
| ·数据分析 | 第68-69页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失共表达 H9N2-NA 和 NDV-F 重组马立克病毒及其生物学特性的比较 | 第69-75页 |
| ·RT-PCR | 第69-70页 |
| ·样品的 RNA 提取与 RT-PCR | 第70页 |
| ·基因扩增产物的回收与纯化 | 第70页 |
| ·质粒构建 | 第70页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第70页 |
| ·质粒转染 | 第70-71页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第71页 |
| ·MZC13NA/F 构建 | 第71-73页 |
| ·meq 基因缺失株的拯救 | 第73页 |
| ·MZC13NA/F 病毒感染细胞 | 第73页 |
| ·DNA 印记杂交 | 第73页 |
| ·NA, F 和 pp38 基因的 mRNA 分析 | 第73-74页 |
| ·病毒感染细胞的 IFA | 第74页 |
| ·ELISA | 第74页 |
| ·Western blot | 第74-75页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失共表达 H9N2-HA 和-NA 重组马立克病毒及其生物学特性的比较 | 第75-85页 |
| ·AIV-H9N2 病毒鸡胚扩增 | 第75页 |
| ·鼠抗 H9N2 NA 蛋白高免血清的制备 | 第75-77页 |
| ·真核 HA 和 NA 共表达质粒的构建 | 第77-78页 |
| ·基因扩增产物的回收与纯化 | 第77页 |
| ·质粒构建 | 第77页 |
| ·构建 HA 和 NA 共表达盒 | 第77-78页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第78页 |
| ·质粒转染 | 第78页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第78页 |
| ·共表达质粒诱导雏鸡抗体反应 | 第78页 |
| ·构建重组马立克病毒 MZC12HA/NA | 第78-80页 |
| ·meq 基因缺失株的拯救 | 第80-81页 |
| ·MZC12HA/NA 病毒感染细胞 | 第81页 |
| ·DNA 印记杂交 | 第81页 |
| ·HA, NA 和 pp38 基因的 mRNA 分析 | 第81-82页 |
| ·病毒感染细胞的 IFA | 第82页 |
| ·ELISA | 第82页 |
| ·Western blot | 第82页 |
| ·重组病毒在体内的复制 | 第82-83页 |
| ·重组病毒和 H9N2 灭活苗对有母源抗体的海兰褐鸡体的抗体水平影响 | 第83页 |
| ·攻毒保护实验 | 第83-85页 |
| 3 结果 | 第85-109页 |
| ·实时荧光绝对定量强毒株 SDWJ1302 不同感染阶段在组织中的含量和分布 | 第85-91页 |
| ·目标 Meq 和 ovo 基因的获得 | 第85页 |
| ·与 vector 连接，转化获得标准质粒 | 第85页 |
| ·Q-PCR 的标准曲线 | 第85-86页 |
| ·Q-PCR 的灵敏度 | 第86-87页 |
| ·Q-PCR 的特异性 | 第87-88页 |
| ·Q-PCR 的重复性 | 第88页 |
| ·SYBR Green Q-PCR 与常规病毒血症灵敏度比较 | 第88-89页 |
| ·羽毛囊和组织中 MDV 基因组的定量 | 第89-91页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失共表达 H9N2-NA 和 NDV-F 重组马立克病毒及其生物学特性的比较 | 第91-98页 |
| ·AIV-NA 或 NDV-F 的表达取决于 pp38/pp24 二聚体的存在 | 第91-92页 |
| ·MZC13NA/F 的传代，纯化与验证 | 第92-93页 |
| ·重组 MZC13NA/F 特性 | 第93-95页 |
| ·实时定量 RT-PCR 检测感染不同 rMDV 的 CEF 中的 NA 和 F 基因启动子活性的比较 | 第95页 |
| ·重组 NA 或 F 蛋白表达的检测 | 第95-96页 |
| ·在 MZC13NA/F 感染的细胞比较 F, NA 和 pp38 蛋白的表达 | 第96-98页 |
| ·以 GX0101 构建 meq 基因缺失共表达 H9N2-HA 和-NA 重组马立克病毒及其生物学特性的比较 | 第98-109页 |
| ·pET28-NA 质粒的酶切鉴定: | 第98-99页 |
| ·重组真核共表达载体的酶切鉴定 | 第99页 |
| ·HA 和 NA 蛋白的间接免疫荧光检测 | 第99-100页 |
| ·动物免疫保护试验 | 第100页 |
| ·MZC12HA/NA 的传代，纯化与验证 | 第100-101页 |
| ·重组 MZC12HA/NA 特性 | 第101-102页 |
| ·实时定量 RT-PCR 检测感染不同 rMDV 的 CEF 中的 HA 和 NA 基因启动子活性的比较 | 第102-103页 |
| ·重组 NA 或 F 蛋白表达的检测 | 第103-104页 |
| ·在 MZC12HA/NA 感染的细胞比较 F, NA 和 pp38 蛋白的表达 | 第104-105页 |
| ·重组病毒在 SPF 鸡体内的复制 | 第105-106页 |
| ·重组病毒免疫有母源抗体的海兰褐后抗体水平的动态变化 | 第106-107页 |
| ·重组病毒和 H9N2 灭活苗对有母源抗体的海兰褐鸡体的抗体水平影响 | 第107页 |
| ·攻毒保护实验 | 第107-109页 |
| 4 讨论 | 第109-116页 |
| 5 结论 | 第116-117页 |
| 6 参考文献 | 第117-136页 |
| 7 致谢 | 第136-138页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第138页 |
