产淀粉酶链霉菌D227的筛选与比较蛋白组学研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-20页 |
| ·链霉菌简介 | 第9页 |
| ·α-淀粉酶简介 | 第9-10页 |
| ·蛋白质组学 | 第10-16页 |
| ·蛋白提取分离技术 | 第11-14页 |
| ·等电聚焦 | 第12页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 | 第12页 |
| ·荧光差异双向电泳技术 | 第12-13页 |
| ·同位素标记相对和绝对定量 | 第13-14页 |
| ·生物质谱技术 | 第14-15页 |
| ·生物信息学分析技术 | 第15-16页 |
| ·蛋白组学技术在α-淀粉酶分泌研究上的应用 | 第16-17页 |
| ·蛋白组的展望 | 第17-18页 |
| ·本研究的研究背景及目的意义 | 第18-19页 |
| ·本研究的主要内容和技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 产淀粉酶链霉菌菌株的筛选及产酶分析 | 第20-29页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·实验仪器和设备 | 第20页 |
| ·样品 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-25页 |
| ·样品预处理 | 第21页 |
| ·放线菌的分离与培养 | 第21页 |
| ·放线菌的菌种挑选、纯化 | 第21页 |
| ·淀粉水解效率 | 第21-22页 |
| ·菌落直径测量 | 第22页 |
| ·水解圈直径测量(使水解圈呈现,便于测量其直径) | 第22页 |
| ·16S rDNA模板制备 | 第22-23页 |
| ·沸水法 | 第22页 |
| ·链霉菌基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·链霉菌16S rDNA的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·16S rDNA产物回收纯化 | 第24页 |
| ·PCR产物测序 | 第24页 |
| ·16S rDNA测序结果NCBI比对 | 第24页 |
| ·菌种保藏 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·链霉菌菌株分离 | 第25页 |
| ·链霉菌淀粉水解能力的比较 | 第25-26页 |
| ·链霉菌菌株基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·16S rDNA的PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| ·链霉菌的16S rDNA序列分析 | 第27-28页 |
| ·结论与讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 不同碳源处理下链霉菌的比较蛋白组学分析 | 第29-49页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·实验仪器和设备 | 第29页 |
| ·供试菌株 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·链霉菌蛋白组提取培养基的选择 | 第31页 |
| ·生长曲线的测定 | 第31-32页 |
| ·蛋白提取材料的培养 | 第32页 |
| ·材料碳源刺激 | 第32页 |
| ·液体淀粉培养基中淀粉水解程度的定性 | 第32-33页 |
| ·胞内蛋白的提取 | 第33-34页 |
| ·蛋白定量 | 第34页 |
| ·蛋白水化上样 | 第34-35页 |
| ·单向胶的制备 | 第35页 |
| ·等电聚焦 | 第35-36页 |
| ·第二向垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备 | 第36页 |
| ·胶条平衡 | 第36页 |
| ·第二向垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第36-37页 |
| ·凝胶的染色与扫描 | 第37页 |
| ·蛋白点数据分析 | 第37页 |
| ·蛋白点的挖取与胶内酶解 | 第37-38页 |
| ·酶解产物的质谱分析和数据库搜索 | 第38页 |
| ·鉴定蛋白的Blast2Go分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-45页 |
| ·高氏一号培养基适合链霉菌蛋白组实验 | 第39页 |
| ·链霉菌的生长曲线 | 第39-40页 |
| ·扩大培养有利于获得足够的生物量 | 第40页 |
| ·碳源刺激后,培养基中淀粉含量的变化 | 第40-41页 |
| ·胞内蛋白提取时间的确定 | 第41-42页 |
| ·电泳结果 | 第42-44页 |
| ·蛋白MALDI-TOF-MS分析 | 第44页 |
| ·通过鉴定的蛋白Blast2GO分析 | 第44-45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-49页 |
| ·蛋白组研究中培养基的选择 | 第45-46页 |
| ·材料制备与碳源刺激 | 第46-47页 |
| ·蛋白提取时间的确定 | 第47页 |
| ·特异表达蛋白点 | 第47-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-51页 |
| ·主要研究结论 | 第49-50页 |
| ·展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
