| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-28页 |
| ·木薯概况 | 第10-11页 |
| ·生氰糖苷研究进展 | 第11-15页 |
| ·生氰糖苷简介 | 第11页 |
| ·生氰糖苷的分布 | 第11-12页 |
| ·生氰糖苷的合成 | 第12-13页 |
| ·生氰糖苷的遗传学机制 | 第13页 |
| ·生氰糖苷致毒机理 | 第13-14页 |
| ·植物产生生氰糖苷的意义 | 第14-15页 |
| ·亚麻仁苷酶(Linamarase)特性 | 第15-16页 |
| ·分子克隆技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第17-24页 |
| ·毕赤酵母研究进展 | 第17页 |
| ·毕赤酵母表达系统优缺点 | 第17-19页 |
| ·常用的表达菌株 | 第19页 |
| ·常用的表达载体 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母转化方法 | 第20页 |
| ·影响毕赤酵母表达外源基因的因素 | 第20-24页 |
| ·组氨酸标签蛋白纯化技术简介 | 第24-26页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 2 实验材料、试剂及仪器 | 第28-33页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28-29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·主要的生化试剂及试剂盒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂及培养基配方 | 第31-32页 |
| ·主要试剂配方 | 第31页 |
| ·主要培养基配方 | 第31-32页 |
| ·PCR引物 | 第32-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-47页 |
| ·木薯linamarase基因组织差异表达分析 | 第33-35页 |
| ·RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·电泳检测总RNA完整性 | 第34页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第34页 |
| ·反转录cDNA质量验证 | 第34-35页 |
| ·木薯SC8 Linamarase组织差异表达RT-PCR分析 | 第35页 |
| ·低氰和高氰木薯品种Linamarase基因表达差异分析 | 第35-36页 |
| ·提取低氰和高氰木薯各器官总RNA | 第35页 |
| ·电泳检测总RNA完整性 | 第35-36页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第36页 |
| ·反转录cDNA质量验证 | 第36页 |
| ·低氰和高氰品种各器官表达差异RT-PCR分析 | 第36页 |
| ·木薯Linamarase的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| ·木薯Linamarase的理化性质预测 | 第36页 |
| ·Linamarase的亚细胞定位预测 | 第36页 |
| ·Linamarase的信号肽预测 | 第36页 |
| ·Linamarase的亲水性和疏水性预测 | 第36-37页 |
| ·Linamarase的跨膜区域预测 | 第37页 |
| ·毕赤酵母中表达木薯Linamarase基因 | 第37-44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第37-42页 |
| ·PCR扩增Linamarase cDNA全长序列 | 第37页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第37-38页 |
| ·PCR纯化产物与T载体连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第38页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第38-39页 |
| ·质粒提取 | 第39-40页 |
| ·酶切鉴定及测序 | 第40页 |
| ·Linamrase编码区克隆和PCR纯化 | 第40-41页 |
| ·PCR产物及质粒的酶切和纯化 | 第41页 |
| ·pPIC3.5K-Linamarase重组载体构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组载体转化毕赤酵母 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体线性化 | 第42页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第42页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第42-43页 |
| ·重组酵母阳性克隆的筛选 | 第43页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第43-44页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第44页 |
| ·重组蛋白的浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白Linamarase分子量的计算 | 第46页 |
| ·Linamarase重组蛋白酶促动力学特性分析 | 第46-47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-58页 |
| ·木薯SC8 Linamarase基因组织差异表达分析 | 第47-48页 |
| ·木薯SC8各器官总RNA提取结果 | 第47页 |
| ·木薯SC8 Linamarase基因组织差异表达RT-PCR分析 | 第47-48页 |
| ·低氰和高氰木薯品种Linamarase基因组织表达差异分析 | 第48-50页 |
| ·5个木薯品种不同组织RNA提取结果 | 第48-49页 |
| ·不同品种相同组织Linamarase基因表达差异RT-PCR分析 | 第49-50页 |
| ·木薯Linamarase的生物信息学分析 | 第50-53页 |
| ·木薯Linamarase的理化性质分析 | 第50-51页 |
| ·Linamarase的亚细胞定位预测 | 第51页 |
| ·Linamarase的信号肽预测分析 | 第51-52页 |
| ·Linamarase的亲水性和疏水性预测分析 | 第52-53页 |
| ·Linamarase的跨膜区域预测分析 | 第53页 |
| ·木薯Linamarase基因克隆、酵母表达载体构建 | 第53-54页 |
| ·重组木薯Linamarase蛋白的表达和纯化 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE检测分析 | 第55页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE检测 | 第55页 |
| ·重组蛋白分子量的计算 | 第55页 |
| ·重组Linamarase酶学特性分析 | 第55-58页 |
| ·重组蛋白的动力学常数 | 第55-56页 |
| ·不同温度对重组蛋白酶活性的影响 | 第56页 |
| ·不同pH对重组蛋白酶活的影响 | 第56页 |
| ·不同盐(NaCl)浓度对重组蛋白酶活的影响 | 第56-58页 |
| 5 讨论 | 第58-61页 |
| ·关于生氰葡萄糖苷酶与硫代葡萄糖苷酶之间的关系 | 第58页 |
| ·关于半定量RT-PCR | 第58页 |
| ·关于木薯Linamarase基因的组织差异性表达 | 第58-59页 |
| ·关于高氰和低氰木薯的组织差异性表达 | 第59页 |
| ·关于酵母的转化方法和注意事项 | 第59-60页 |
| ·关于生氰葡萄糖苷酶Linamarase的研究价值 | 第60-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录：缩写词表(Abbreviation) | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
