| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 插图及附表目录 | 第12-14页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-33页 |
| 1 动物流感概述 | 第16-22页 |
| ·病原分类地位 | 第16-17页 |
| ·流感病毒的亚型 | 第17页 |
| ·基因组和蛋白质组 | 第17-18页 |
| ·各种动物流感及其流行状况 | 第18-22页 |
| 2 国内外动物流感检测技术现状 | 第22-25页 |
| ·病原学检测技术 | 第22-24页 |
| ·血清学检测技术 | 第24-25页 |
| 3 国内外动物流感检测技术标准现状 | 第25-27页 |
| ·OIE动物流感检测技术标准 | 第25-26页 |
| ·WHO动物流感检测技术标准 | 第26页 |
| ·我国动物流感检测技术现状及存在问题 | 第26-27页 |
| 4 核酸检测标准物质研究进展 | 第27-32页 |
| ·影响核酸检测结果的主要因素 | 第28页 |
| ·常用核酸标准物质 | 第28-32页 |
| ·展望 | 第32页 |
| 5 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 第二章 H1和H3亚型流感病毒荧光RT-PCR检测方法的建立 | 第33-55页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 1 材料 | 第34-36页 |
| ·病毒毒株及核酸 | 第34页 |
| ·试剂、载体和菌株 | 第34-35页 |
| ·溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-43页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·引物和探针的设计和筛选 | 第37-40页 |
| ·荧光RT-PCR反应条件的优化 | 第40-41页 |
| ·体外转录cRNA标准品的制备 | 第41-43页 |
| ·特异性试验 | 第43页 |
| ·灵敏度试验 | 第43页 |
| ·重复性试验 | 第43页 |
| ·与同类方法的比较试验 | 第43页 |
| ·临床样品检测验证 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-52页 |
| ·引物、探针的筛选 | 第43-44页 |
| ·荧光RT-PCR反应条件的优化 | 第44-46页 |
| ·体外转录cRNA标准品的制备 | 第46-48页 |
| ·特异性试验 | 第48-50页 |
| ·灵敏度试验结果 | 第50页 |
| ·重复性试验结果 | 第50-51页 |
| ·与同类方法的比较试验 | 第51-52页 |
| ·临床样品检测验证 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 H1和H3亚型流感病毒荧光RT-PCR检测方法国家标准的起草和验证 | 第55-65页 |
| 摘要 | 第55页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| ·病毒毒株 | 第55-56页 |
| ·主要试剂和溶液配制 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-59页 |
| ·样品的采集与前处理 | 第56-57页 |
| ·核酸提取方法的比较研究 | 第57页 |
| ·荧光RT-PCR检测 | 第57-58页 |
| ·国家标准草案的起草 | 第58页 |
| ·国家标准草案验证 | 第58页 |
| ·标准函审征求意见 | 第58页 |
| ·标准送审稿的形成 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-63页 |
| ·核酸提取方法的比较 | 第59页 |
| ·采集临床样品的检测 | 第59-60页 |
| ·国家标准草案的起草 | 第60页 |
| ·国家标准草案的验证 | 第60-62页 |
| ·标准函审征求意见 | 第62-63页 |
| ·标准送审稿的形成 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 内含A型流感病毒M基因装甲RNA病毒样颗粒的构建和表达 | 第65-81页 |
| 摘要 | 第65页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·毒株 | 第65-66页 |
| ·载体和菌株 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·溶液的配制 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-72页 |
| ·引物和探针设计与合成 | 第66-67页 |
| ·MS2噬菌体ACP基因片段的扩增 | 第67-68页 |
| ·表达载体pET32a-ACP的构建 | 第68页 |
| ·内含流感病毒M基因病毒样颗粒(AR-M)重组表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·AR-M的原核表达和核酸酶消化鉴定 | 第69-70页 |
| ·AR-M的纯化和鉴定 | 第70-71页 |
| ·AR-M的电镜观察 | 第71-72页 |
| ·AR-M的稳定性检测 | 第72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-78页 |
| ·MS2噬菌体ACP基因片段的扩增 | 第72页 |
| ·表达载体pET32a-ACP的构建 | 第72-74页 |
| ·重组表达载体pET32a-ACP-M的构建和鉴定 | 第74-75页 |
| ·AR-M的原核表达和核酸酶消化鉴定 | 第75页 |
| ·AR-M的纯化和鉴定 | 第75-77页 |
| ·AR-M的电镜观察结果 | 第77-78页 |
| ·AR-M的稳定性检测 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 5 小结 | 第79-81页 |
| 第五章 A型流感病毒核酸检测装甲RNA标准物质的研制 | 第81-89页 |
| 摘要 | 第81页 |
| 1 材料 | 第81-82页 |
| ·毒株和菌株 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81-82页 |
| ·引物和探针 | 第82页 |
| ·主要仪器 | 第82页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-84页 |
| ·AR-M的大量诱导表达 | 第82-83页 |
| ·AR-M的纯化和DNase Ⅰ处理 | 第83页 |
| ·A型流感病毒实时荧光RT-PCR检测cRNA标准品和标准曲线的研究 | 第83页 |
| ·流感病毒AR-M标准物质的初步定值和制备 | 第83页 |
| ·均匀性检验 | 第83页 |
| ·稳定性检验 | 第83-84页 |
| ·协作标定及不确定度分析 | 第84页 |
| 3 结果 | 第84-87页 |
| ·流感病毒荧光定量RT-PCR检测标准曲线的绘制 | 第84页 |
| ·流感病毒装甲RNA标准物质的初步定值和制备 | 第84-85页 |
| ·均匀性检验验结果 | 第85-86页 |
| ·稳定性检验结果 | 第86页 |
| ·协作标定及不确定度分析结果 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-88页 |
| 5 小结 | 第88-89页 |
| 研究结论 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100-101页 |
| 附录1 体外转录cRNA标准品对应目的基因片段的序列 | 第101-102页 |
| 附录2 标准草案《动物流感病毒H1亚型荧光RT-PCR检测方法》 | 第102-111页 |
| 附录3 标准草案《动物流感病毒H3亚型荧光RT-PCR检测方法》 | 第111-119页 |
