| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-39页 |
| ·青枯菌 | 第15-20页 |
| ·青枯菌及其危害 | 第15页 |
| ·青枯菌的病害循环 | 第15-16页 |
| ·青枯菌的毒性因子 | 第16-18页 |
| ·毒力和致病性的调控网络 | 第18-20页 |
| ·革兰氏阴性细菌的分泌系统 | 第20-24页 |
| ·Ⅰ 型分泌系统 | 第21页 |
| ·Ⅱ 型分泌系统 | 第21-22页 |
| ·Ⅲ 型分泌系统 | 第22-23页 |
| ·Ⅳ 型分泌系统 | 第23页 |
| ·Ⅴ 型分泌系统 | 第23-24页 |
| ·新型的分泌系统——Ⅵ 型分泌系统 | 第24-36页 |
| ·Ⅵ 型分泌系统的结构 | 第25-30页 |
| ·Ⅵ 型分泌系统的效应子 | 第30页 |
| ·Ⅵ 型分泌系统的调节因子 | 第30-36页 |
| ·展望 | 第36页 |
| ·植物青枯菌 Ⅵ 型分泌系统 | 第36-37页 |
| ·本论文研究的目的意义及技术路线 | 第37-39页 |
| ·本文研究的目的意义 | 第37-38页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| 第二章 青枯菌 Ⅵ 型分泌系统 tssM 基因致病力及基础生物学测定 | 第39-54页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·供试菌株、质粒及培养条件 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·致病力测定 | 第41-42页 |
| ·tssM 基因突变株在根部定殖及扩展能力的研究 | 第42页 |
| ·运动性的测定 | 第42页 |
| ·生物膜的测定 | 第42-43页 |
| ·qRT-PCR 检测鞭毛及相关基因的表达 | 第43-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·致病力测定结果 | 第46页 |
| ·根部定殖及向上扩展菌量的分析 | 第46-48页 |
| ·运动性测定 | 第48-49页 |
| ·生物膜形成测定 | 第49页 |
| ·qRT-PCR 检测鞭毛相关基因的表达 | 第49-50页 |
| ·qRT-PCR 检测 T3SS 相关基因表达 | 第50-51页 |
| ·结论与讨论 | 第51-54页 |
| 第三章 青枯菌 Ⅵ 型分泌系统 tssB 基因突变菌株及互补菌株的构建 | 第54-69页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·生物信息学分析 | 第56页 |
| ·tssB 基因上下游序列 PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·庆大霉素基因的 PCR 扩增 | 第57页 |
| ·tssB 基因重组自杀质粒的构建及鉴定 | 第57-58页 |
| ·植物青枯菌 GMI1000 感受态细胞的制备及电转化 | 第58页 |
| ·tssB 基因突变株的筛选和鉴定 | 第58-59页 |
| ·互补载体的构建及鉴定 | 第59页 |
| ·互补菌株的筛选与鉴定 | 第59页 |
| ·互补载体在突变菌株中表达的验证 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-66页 |
| ·tssB 基因生物信息学分析 | 第60-63页 |
| ·tssB 基因重组自杀质粒的构建 | 第63-64页 |
| ·tssB 基因突变株的构建 | 第64-65页 |
| ·互补菌株的构建与鉴定 | 第65页 |
| ·互补载体在突变菌株 GMI1000ΔtssB 中的表达情况 | 第65-66页 |
| ·结论与讨论 | 第66-69页 |
| 第四章 青枯菌 Ⅵ 型分泌系统 tssB 基因致病力及基础生物学测定 | 第69-80页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·供试菌株、质粒及培养条件 | 第69-70页 |
| ·培养基 | 第70页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·致病力测定 | 第70页 |
| ·tssB 基因突变株在根部定殖及扩展能力的研究 | 第70页 |
| ·运动性的测定 | 第70页 |
| ·生物膜的测定 | 第70页 |
| ·qRT-PCR 检测鞭毛及 T3SS 相关基因的表达 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-77页 |
| ·致病力测定结果 | 第71-72页 |
| ·根部定殖及向上扩展菌量的分析 | 第72-73页 |
| ·运动性测定 | 第73-74页 |
| ·生物膜形成测定 | 第74页 |
| ·qRT-PCR 检测鞭毛相关基因的表达 | 第74-75页 |
| ·qRT-PCR 检测 T3SS 相关基因表达 | 第75-77页 |
| ·结论与讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 TssB 蛋白和 TssC 蛋白的相互作用研究 | 第80-96页 |
| ·实验材料 | 第80-82页 |
| ·供试菌株、质粒及培养条件 | 第80-81页 |
| ·培养基 | 第81-82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·tssB 和 tssC 基因诱饵载体和捕获载体的构建 | 第82-83页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第83-84页 |
| ·重组质粒的毒性及自激活检测 | 第84页 |
| ·酵母双杂交检测 | 第84页 |
| ·TssB 分段序列捕获载体的构建 | 第84-85页 |
| ·TssB 分段重组质粒的毒性及自激活检测 | 第85-86页 |
| ·酵母双杂交检测 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-93页 |
| ·tssB 和 tssC 基因诱饵载体和捕获载体的构建 | 第86-87页 |
| ·tssB 和 tssC 基因重组质粒的毒性检测 | 第87页 |
| ·tssB 和 tssC 基因重组质粒的自激活检测 | 第87-88页 |
| ·TssB 和 TssC 蛋白互作检测 | 第88-89页 |
| ·tssB 基因分段重组质粒的构建 | 第89-90页 |
| ·tssB 基因分段重组质粒的毒性检测 | 第90-91页 |
| ·捕获载体 pGBKTssC 的自激活检测 | 第91页 |
| ·TssB 蛋白分段与 TssC 蛋白的互作检测 | 第91-93页 |
| ·结论与讨论 | 第93-96页 |
| 第六章 Hcp 和 TssB 蛋白的表达纯化和抗体制备及蛋白泌出分析 | 第96-110页 |
| ·实验材料 | 第96-97页 |
| ·供试菌株、质粒及培养条件 | 第96-97页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97-102页 |
| ·hcp 基因和 tssB 基因原核表达载体的构建 | 第97-98页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及优化 | 第98-99页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第99-100页 |
| ·泌出蛋白的提取 | 第100页 |
| ·膜蛋白的提取 | 第100页 |
| ·Western Blot 分析 | 第100-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-107页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第102-103页 |
| ·蛋白的诱导表达和优化 | 第103-104页 |
| ·蛋白的纯化 | 第104-105页 |
| ·Hcp 的泌出试验 | 第105-106页 |
| ·TssB 蛋白的亚细胞分离实验 | 第106-107页 |
| ·结论与讨论 | 第107-110页 |
| 第七章 全文结论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 作者简历 | 第129页 |
