昆明市戊型肝炎病毒流行病学调查及ORF2蛋白的原核表达研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 插图和附表清单 | 第11-12页 |
| 缩略语索引 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·分子生物学 | 第14-15页 |
| ·基因型和血清型 | 第15-16页 |
| ·临床症状及病程 | 第16-17页 |
| ·HEV的检测 | 第17页 |
| ·HEV流行病学 | 第17-20页 |
| ·HEV在人群中的流行情况 | 第17-19页 |
| ·HEV在动物中的流行情况 | 第19-20页 |
| ·HEV体外培养 | 第20-21页 |
| ·HEV的动物模型 | 第21页 |
| ·HEV传播途径 | 第21-22页 |
| ·HEV的防控 | 第22-23页 |
| ·环境卫生 | 第22页 |
| ·HEV疫苗 | 第22页 |
| ·感染性cDNA克隆 | 第22-23页 |
| ·RNA干涉抗HEV感染 | 第23页 |
| ·研究内容及目的意义 | 第23-25页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| ·目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 昆明市人群戊型肝炎病毒流行情况调查 | 第25-36页 |
| ·实验材料与方法 | 第26-30页 |
| ·实验样品 | 第26页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·血清HEV IgG、IgM抗体检测 | 第28页 |
| ·HEV IgG、IgM抗体阴阳性样品判断 | 第28-29页 |
| ·HEV病毒核酸提取及RT-nPCR | 第29-30页 |
| ·统计分析 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·孕妇与儿童人群HEV IgG抗体检测 | 第30-31页 |
| ·不同孕期的孕妇抗—HEV IgG抗体阳性率 | 第31页 |
| ·不同年龄的孕妇抗—HEV IgG抗体阳性率 | 第31-32页 |
| ·儿童抗—HEV IgG抗体检测 | 第32页 |
| ·孕妇抗—HEV IgM抗体检测 | 第32-33页 |
| ·HEV RNA检测 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 第三章 昆明市动物戊型肝炎病毒流行情况调查 | 第36-50页 |
| ·材料与方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·结果 | 第42-48页 |
| ·树鼩血清HEV IgG抗体检测 | 第42-43页 |
| ·粪便中HEV RNA检测 | 第43页 |
| ·pMD-18T/HEV重组质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·测序结果 | 第44-45页 |
| ·GeneBank数据库中进行核酸Blast比对 | 第45-46页 |
| ·核苷酸序列同源性及系统进化分析 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 昆明市HEV流行株全基因组序列扩增与分析 | 第50-64页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·样品、菌株及载体 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·PCR引物设计 | 第51-52页 |
| ·样品总RNA提取及RT | 第52页 |
| ·巢式PCR | 第52-53页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第53-54页 |
| ·PCR产物T/A克隆 | 第54页 |
| ·连接产物转化感受态DH5a | 第54页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第54页 |
| ·序列拼接及系列同源进化分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-62页 |
| ·RT-nPCR扩增HEV全基因组 | 第54-56页 |
| ·HEV全基因组序列测序 | 第56-59页 |
| ·基因序列NCBI BLAST比对 | 第59页 |
| ·HEV全基因组核苷酸序列同源性及系统进化分析 | 第59-61页 |
| ·HEV ORFs分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第五章 HEV ORF2蛋白的原核表达及鉴定 | 第64-81页 |
| ·材料方法 | 第64-75页 |
| ·材料 | 第64-69页 |
| ·方法 | 第69-75页 |
| ·实验结果 | 第75-79页 |
| ·PCR扩增ORF2目的基因 | 第75页 |
| ·酶切鉴定重组表达质粒pFN18the/ORF2 | 第75-76页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第76-77页 |
| ·Halo-ORF2蛋白的表达形式确定 | 第77页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第77-78页 |
| ·纯化产物的Western blot分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第六章 全文总结 | 第81-83页 |
| 第七章 问题与展望 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 附录A | 第89页 |
