| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 文献综述 | 第16-39页 |
| 1 耐辐射球菌 | 第16-27页 |
| ·细胞结构 | 第16-18页 |
| ·基因组结构 | 第18-21页 |
| ·DNA损伤抗性 | 第21-22页 |
| ·D.radiodurans的抗性机制 | 第22-27页 |
| 2 DEAD-box RNA解旋酶 | 第27-38页 |
| ·简介 | 第27-29页 |
| ·DEAD-box蛋白的结构 | 第29-31页 |
| ·DEAD-box蛋白之间的保守基序和特异性互作 | 第31-35页 |
| ·DEAD-box蛋白家族成员的细胞功能 | 第35-38页 |
| 3 本文研究路线图 | 第38-39页 |
| 第一章 耐辐射球菌核酸解旋酶的生物信息学分析 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料和方法 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-52页 |
| ·RNA解旋酶氨基酸序列及motif在线分析 | 第40-45页 |
| ·DNA解旋酶氨基酸序列及motif在线分析 | 第45-50页 |
| ·六种解旋酶结构域同源性分析序列比对BLAST | 第50-51页 |
| ·耐辐射球菌中所有核酸解旋酶的NCBI注释 | 第51页 |
| ·耐辐射球菌中所有解旋酶的同源性分析 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第二章 耐辐射球菌解旋酶突变株的构建与鉴定 | 第53-69页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·实验材料与仪器 | 第54-55页 |
| ·菌株和试剂 | 第54-55页 |
| ·仪器与设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·菌株培养 | 第55页 |
| ·基因缺失突变株的构建方法 | 第55-56页 |
| ·体外“三段连接” | 第56-57页 |
| ·连接产物转化耐辐射球菌 | 第57页 |
| ·突变株的鉴定 | 第57页 |
| ·电离辐射处理 | 第57-58页 |
| ·结果和分析 | 第58-67页 |
| ·△DR0335缺失突变株的构建 | 第58-59页 |
| ·△DRB0135缺失突变株的构建 | 第59-60页 |
| ·△DR1624缺失突变株的构建 | 第60-61页 |
| ·△DR0065缺失突变株的构建 | 第61-63页 |
| ·△DR1532缺失突变株的构建 | 第63-64页 |
| ·△DR0135-0136双突变体的构建 | 第64-65页 |
| ·△DR1624补偿株的构建 | 第65-66页 |
| ·突变菌株电离辐射敏感特性初窥 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 突变株特性及功能补偿活性分析 | 第69-81页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料、试剂与主要设备 | 第69-70页 |
| ·材料和试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·生长曲线测定 | 第70页 |
| ·菌株抗逆性处理 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-79页 |
| ·ADR1624菌株的生长出现了严重的延滞 | 第71-73页 |
| ·不同温度下固体培养基DR1624突变株的生长状况 | 第73-74页 |
| ·突变株对γ电离辐射的抗性 | 第74-76页 |
| ·突变株对紫外辐射的抗性 | 第76-78页 |
| ·突变株对H_2O_2的抗性 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第四章 突变菌株抗氧化活性分析 | 第81-96页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·材料、试剂与主要仪器 | 第81页 |
| ·材料和试剂 | 第81页 |
| ·主要仪器 | 第81页 |
| ·NBT法测量SOD活性 | 第81-85页 |
| ·NBT法反应原理 | 第81-82页 |
| ·样品准备 | 第82-83页 |
| ·溶液的配制 | 第83页 |
| ·样品测定 | 第83-84页 |
| ·样品中总SOD活力的计算 | 第84-85页 |
| ·过氧化氢酶活性检测 | 第85-88页 |
| ·反应原理 | 第85-86页 |
| ·样品准备 | 第86页 |
| ·溶液配制 | 第86页 |
| ·标准曲线的测定 | 第86-87页 |
| ·样品测定 | 第87页 |
| ·样品中过氧化氢酶酶活力的计算 | 第87-88页 |
| ·ABTS快速法测量细胞总抗氧化活性 | 第88-92页 |
| ·反应原理 | 第89页 |
| ·样品准备 | 第89页 |
| ·溶液配制 | 第89-90页 |
| ·标准曲线的测定 | 第90页 |
| ·总抗氧化能力的测定 | 第90-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-95页 |
| ·菌株体外SOD活性 | 第92-93页 |
| ·菌株体外过氧化氢酶活性 | 第93-94页 |
| ·菌株体外总抗氧化活性 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| 第五章 耐辐射球菌DR1624蛋白的体外表达 | 第96-104页 |
| ·材料、试剂与设备 | 第96-97页 |
| ·菌株与质粒 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·主要仪器与设备 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-99页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第97页 |
| ·dr1624基因的克隆 | 第97页 |
| ·DR1624蛋白表达质粒的构建 | 第97-98页 |
| ·DR1624蛋白的表达 | 第98页 |
| ·镍柱纯化 | 第98-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-104页 |
| ·dr1624基因ORF的实际长度为1791bp | 第99-102页 |
| ·DR1624蛋白体外表达失败 | 第102-104页 |
| 第六章 总结与展望 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-111页 |
| 已发表论文 | 第111页 |