| 摘要 | 第1-17页 |
| Abstract | 第17-21页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 第一部分 文献综述 | 第22-37页 |
| 第一章 滞育在寄生性线虫及秀丽隐杆线虫中的研究进展 | 第23-30页 |
| 1 捻转血矛线虫病的危害与防治 | 第23页 |
| 2 滞育现象在寄生性线虫生活史中的生物学重要性 | 第23-24页 |
| 3 捻转血矛线虫滞育现象的流行病学意义 | 第24-25页 |
| 4 秀丽隐杆线虫滞育机理研究 | 第25-28页 |
| 5 寄生性线虫滞育机理的研究进展 | 第28-29页 |
| 6 小结 | 第29-30页 |
| 第二章 秀丽隐杆线虫在寄生性线虫研究中的应用 | 第30-37页 |
| 1 秀丽隐杆线虫作为模式生物的优势 | 第30-32页 |
| ·生物学特征及优势 | 第30页 |
| ·秀丽隐杆线虫可利用的资源 | 第30-32页 |
| 2 秀丽隐杆线虫在寄生性线虫研究中的应用 | 第32-36页 |
| ·利用RNAi进行基因功能性分析 | 第32-34页 |
| ·利用秀丽隐杆线虫进行寄生虫基因功能的分析 | 第34-35页 |
| ·利用秀丽隐杆线虫作为表达系统 | 第35-36页 |
| 3 小结 | 第36-37页 |
| 第二部分 研究内容 | 第37-133页 |
| 第三章 捻转血矛线虫幼虫培养方法的改进 | 第38-45页 |
| 摘要 | 第38-39页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·试验动物 | 第39页 |
| ·捻转血矛线虫 | 第39页 |
| ·幼虫的培养 | 第39-40页 |
| ·虫卵的获得 | 第39页 |
| ·培养基的制备 | 第39-40页 |
| ·虫体的培养条件筛选与虫体获得 | 第40页 |
| ·人工感染试验 | 第40页 |
| ·虫卵计数 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-44页 |
| ·捻转血矛线虫成虫的鉴定 | 第40页 |
| ·虫体培养条件的筛选 | 第40-41页 |
| ·各阶段幼虫的培养 | 第41-43页 |
| ·感染试验结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 捻转血矛线虫滞育期差异片段的获得 | 第45-64页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-52页 |
| ·材料和试剂 | 第45-46页 |
| ·试验动物 | 第45页 |
| ·线虫和培养基 | 第45-46页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·分子生物学试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·溶液的配制 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·差异显示引物设计 | 第46-47页 |
| ·滞育期虫体和正常四期幼虫的获得 | 第47页 |
| ·银染m RNA差异显示技术 | 第47-49页 |
| ·差异片段的回收 | 第49-50页 |
| ·回收片段与克隆载体的连接 | 第50页 |
| ·转化 | 第50-51页 |
| ·转化细菌质粒DNA的提取 | 第51页 |
| ·克隆重组载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·序列测定与分析 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-62页 |
| ·滞育期虫体的确定 | 第52页 |
| ·银染mRNA差异显示技术 | 第52-56页 |
| ·差异基因EST序列的获得与分析 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR验证 | 第57-58页 |
| ·测序结果分析 | 第58-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 利用RNAi技术筛选捻转血矛线虫滞育差异片段 | 第64-76页 |
| 摘要 | 第64-65页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·材料和试剂 | 第65页 |
| ·线虫与培养基 | 第65页 |
| ·菌种和菌株 | 第65页 |
| ·分子生物学试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·溶液的配制 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·秀丽隐杆线虫总RNA的提取 | 第65页 |
| ·RNAi干扰方法的建立 | 第65-67页 |
| ·差异片段RANi载体的构建 | 第67页 |
| ·差异显示基因的RNAi试验 | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-74页 |
| ·RNAi干扰方法的建立 | 第68-70页 |
| ·差异片段的RNAi试验 | 第70-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 捻转血矛线虫daf-22基因功能的研究 | 第76-106页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| 1 材料和方法 | 第77-89页 |
| ·材料 | 第77-78页 |
| ·秀丽隐杆线虫 | 第77页 |
| ·菌株与质粒 | 第77-78页 |
| ·工具酶及试剂 | 第78页 |
| ·主要仪器 | 第78页 |
| ·溶液的配制 | 第78页 |
| ·实验方法 | 第78-89页 |
| ·捻转血矛线虫总RNA提取 | 第78-79页 |
| ·5’RACE扩增 | 第79-82页 |
| ·3’RACE扩增 | 第82-84页 |
| ·H.c DAF-22序列分析 | 第84页 |
| ·H.c daf-22基因组获得与分析 | 第84页 |
| ·捻转血矛线虫daf-22基因5’侧翼区的扩增 | 第84-87页 |
| ·秀丽隐杆线虫daf-22基因启动子的构建 | 第87页 |
| ·daf-22Pc- pPD95.77-daf22Hc重组载体的构建 | 第87-88页 |
| ·daf-22Pc- pPD95.77-daf22Hc在秀丽隐杆线虫野生株体内的转基因表达 | 第88页 |
| ·捻转血矛线虫daf-22基因对秀丽隐杆线虫daf-22基因的拯救 | 第88-89页 |
| ·RNAi | 第89页 |
| 2 结果 | 第89-104页 |
| ·捻转血矛线虫daf-22基因的获得 | 第89-92页 |
| ·捻转血矛线虫daf-22基因5’侧翼区的获得及启动子活性的验证 | 第92-95页 |
| ·秀丽隐杆线虫daf-22基因5’侧翼区的克隆及启动子活性的验证 | 第95-96页 |
| ·daf-22Pc- pPD95.77-daf-22Hc重组载体的构建 | 第96-97页 |
| ·daf-22Pc- pPD95.77-daf22Hc重组载体秀丽隐杆线虫野生株体内的转基因表达 | 第97-99页 |
| ·捻转血矛线虫daf-22基因对秀丽隐杆线虫daf-22突变株的拯救 | 第99-103页 |
| ·RNAi | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 第七章 捻转血矛线虫热激蛋白70的功能研究 | 第106-133页 |
| 摘要 | 第106-107页 |
| 1 材料和方法 | 第107-112页 |
| ·主要材料和试剂 | 第107-108页 |
| ·线虫和培养基 | 第107页 |
| ·菌株与质粒 | 第107-108页 |
| ·工具酶及试剂 | 第108页 |
| ·主要仪器 | 第108页 |
| ·溶液的配制 | 第108页 |
| ·方法 | 第108-112页 |
| ·捻转血矛线虫基因组DNA的提取 | 第108页 |
| ·捻转血矛线虫hsp70部分基因组的获得 | 第108页 |
| ·hsp70基因全基因组的获得与分析 | 第108-109页 |
| ·hsp70基因基因组序列分析 | 第109页 |
| ·Hc-hsp70基因cDNA编码区的获得 | 第109页 |
| ·生物信息学及进化树分析 | 第109页 |
| ·Hc-hsp70基因5’侧翼区启动子基序分析、构建和活性验证 | 第109-110页 |
| ·Hc-hsp70基因的原核表达及纯化 | 第110-111页 |
| ·Hc-hsp70在C.elegans中的表达 | 第111页 |
| ·western-blot分析 | 第111-112页 |
| ·转基因虫体Hc-hsp70与Ce-hsp-1荧光定量PCR分析 | 第112页 |
| 2 结果 | 第112-131页 |
| ·捻转血矛线虫hsp70基因组的获得 | 第112-114页 |
| ·Hc-hsp70全基因编码区的获得 | 第114-118页 |
| ·Hc-hsp70基因结构分析 | 第118-120页 |
| ·Hc-hsp70 5’侧翼区分析 | 第120-121页 |
| · | 第121-125页 |
| ·Hc-hsp70基因的原核表达 | 第125-128页 |
| ·Hc-hsp70在C.elegans体内的表达 | 第128-130页 |
| ·转基因虫体内C.elegans hsp-1基因表达水平的检测 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-133页 |
| 全文结论 | 第133-134页 |
| 创新点 | 第134-135页 |
| 研究展望 | 第135-136页 |
| 附录Ⅰ 溶液配制 | 第136-140页 |
| 附录Ⅱ 英文缩写注释 | 第140-142页 |
| 附录Ⅲ 实验过程中涉及的主要引物序列 | 第142-144页 |
| 附录Ⅳ 实验所获得的一些序列 | 第144-147页 |
| 参考文献 | 第147-162页 |
| 攻读博士学位期间的主要成果 | 第162-163页 |
| 致谢 | 第163页 |
