| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1 SIRT1 的表达及功能调控 | 第15-16页 |
| ·SIRT1 表达的调节 | 第15页 |
| ·蛋白-蛋白相互作用与类泛素化调节 SIRT1 去乙酰化酶活性 | 第15-16页 |
| 2 SIRT1 在肿瘤发生发展中的作用 | 第16-19页 |
| ·SIRT1 促进肿瘤的发生发展 | 第16-18页 |
| ·SIRT1 调节肿瘤组蛋白和非组蛋白的去乙酰化和肿瘤抑制基因的甲基化 | 第16-17页 |
| ·SIRT1 去乙酰化肿瘤组蛋白 | 第16页 |
| ·SIRT1 去乙酰化肿瘤非组蛋白 | 第16-17页 |
| ·SIRT1 诱导肿瘤抑制基因启动子可遗传的 CpG 岛甲基化 | 第17页 |
| ·SIRT1 阻断细胞衰老、分化和压力诱导的细胞凋亡过程，促进细胞生长、血管舒张和血管再生 | 第17-18页 |
| ·SIRT1 在人肿瘤组织中过表达 | 第18页 |
| ·SIRT1 抑制肿瘤的发生发展 | 第18-19页 |
| 3 SIRT1 与肿瘤放疗和化疗的关系 | 第19-21页 |
| ·SIRT1 与肿瘤化疗的关系 | 第19-20页 |
| ·SIRT1 与化疗药物 Cisplatin 的关系 | 第19页 |
| ·SIRT1 与耐药基因 Mdr1 的关系 | 第19-20页 |
| ·SIRT1 与肿瘤放疗的关系 | 第20-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-22页 |
| 1 实验来源和意义 | 第21页 |
| 2 实验内容 | 第21-22页 |
| 第三章 实验材料 | 第22-28页 |
| 1 主要质粒、试剂盒和抗体 | 第22-23页 |
| 2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 3 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 4 引物与 Linker | 第26-27页 |
| 5 细胞株系及培养条件 | 第27-28页 |
| 第四章 实验方法 | 第28-40页 |
| 1 细胞培养、传代和冻存 | 第28-29页 |
| 2 表达质粒 pLKO.1-sh-SIRT1 的构建 | 第29-33页 |
| ·sh-RNA(1,2,3）退火 | 第29-30页 |
| ·pLKO.1 载体的获得 | 第30页 |
| ·sh-RNA(1,2,3）与 pLKO.1 载体的连接 | 第30-31页 |
| ·sh-RNA(1,2,3）与 pLKO.1 载体连接产物的转化 | 第31页 |
| ·质粒 pLKO.1-sh-SIRT1(1,2,3）的筛选 | 第31-32页 |
| ·质粒 pLKO.1-sh-SIRT1(1,2,3）和 pLKO.1-sh-Scramble 的大量抽提 | 第32-33页 |
| 3 慢病毒 Lv-sh-SIRT1(1,2,3）和 Lv- sh-Scramble 的包装、纯化、滴度测定和有效性检测 | 第33-35页 |
| ·慢病毒 Lv-sh-SIRT1(1,2,3）和 Lv- sh-Scramble 的包装 | 第33-34页 |
| ·慢病毒 Lv-sh-SIRT1(1,2,3）和 Lv-sh-Scramble 的收集和纯化 | 第34-35页 |
| ·慢病毒 Lv-sh-SIRT1(1,2,3）和 Lv-sh-Scramble 的滴度测定 | 第35页 |
| 4 检测慢病毒 Lv-sh-SIRT1(1,2,3）的有效性 | 第35-37页 |
| 5 细胞增殖实验 | 第37页 |
| 6 Transwell 细胞迁移实验 | 第37-38页 |
| 7 平板克隆形成实验 | 第38-39页 |
| 8 成球实验 | 第39页 |
| 9 统计学分析 | 第39-40页 |
| 第五章 实验结果 | 第40-50页 |
| 1 检测质粒 pLKO.1-sh-SIRT1(1,2,3）的构建 | 第40页 |
| 2 检测肝癌细胞系中 SIRT1 的表达水平 | 第40-41页 |
| 3 检测 3 条干扰 SIRT1 表达的 shRNA 的有效性 | 第41页 |
| 4 检测加入慢病毒 Lv-sh-SIRT1-3 后 SIRT1 的表达情况 | 第41-42页 |
| 5 检测下调 SIRT1 表达对肝癌细胞系功能的影响 | 第42-50页 |
| ·检测下调 SIRT1 表达对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第42-43页 |
| ·检测下调 SIRT1 表达对肝癌细胞迁移能力的影响 | 第43-45页 |
| ·检测下调 SIRT1 表达对肝癌细胞克隆形成能力的影响 | 第45-47页 |
| ·检测下调 SIRT1 表达对肝癌细胞自我更新能力的影响 | 第47-50页 |
| 第六章 讨论 | 第50-52页 |
| 第七章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
