| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-41页 |
| ·溶瘤腺病毒在肿瘤基因治疗中的进展 | 第18-23页 |
| ·肿瘤的基因病毒治疗进展 | 第18-20页 |
| ·腺病毒载体 | 第20-21页 |
| ·溶瘤腺病毒载体的发展思路 | 第21-23页 |
| ·溶瘤腺病毒对肿瘤细胞靶向性的研究 | 第23-31页 |
| ·特异性启动子调控溶瘤腺病毒 | 第24-25页 |
| ·基因敲除调控溶瘤腺病毒 | 第25-26页 |
| ·改造腺病毒的衣壳蛋白 | 第26-31页 |
| ·白细胞介素-24 在基因治疗肿瘤中的应用 | 第31-36页 |
| ·IL-24 的分子结构、受体及信号传导 | 第31-32页 |
| ·IL-24 的抗肿瘤机制 | 第32-36页 |
| ·实验方案设计 | 第36-41页 |
| ·课题来源 | 第36页 |
| ·实验目的和意义 | 第36-37页 |
| ·构建嵌合型溶瘤腺病毒的实验思路 | 第37-40页 |
| ·研究内容 | 第40-41页 |
| 2 实验材料 | 第41-46页 |
| ·主要仪器与设备 | 第41-42页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·工具酶及试剂 | 第42-43页 |
| ·引物设计与合成 | 第43页 |
| ·细胞株 | 第43-44页 |
| ·腺病毒 | 第44页 |
| ·培养基及细胞培养液 | 第44-45页 |
| ·主要溶液的配制 | 第45-46页 |
| 3 实验方法 | 第46-67页 |
| ·分子克隆实验方法 | 第46-51页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第46-49页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 DNA | 第49-50页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第50-51页 |
| ·腺病毒载体重组 | 第51-54页 |
| ·pCN205-11-EGFP 质粒重组 | 第51-54页 |
| ·细胞培养 | 第54-58页 |
| ·细胞复苏 | 第54-55页 |
| ·细胞传代 | 第55-56页 |
| ·细胞计数 | 第56-57页 |
| ·细胞冻存 | 第57-58页 |
| ·悬浮细胞培养 | 第58页 |
| ·病毒的扩增、纯化及滴度测定 | 第58-62页 |
| ·病毒的小量扩增及鉴定 | 第58-60页 |
| ·病毒的大量扩增与纯化 | 第60-61页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第61-62页 |
| ·细胞实验 | 第62-67页 |
| ·流式细胞术检测淋巴瘤细胞系表面受体 | 第62页 |
| ·MTT 检测病毒对细胞的杀伤能力 | 第62-63页 |
| ·Real-Time PCR 检测子代病毒复制能力 | 第63-64页 |
| ·流式细胞术检测病毒对细胞的感染效率 | 第64页 |
| ·Western Blot 检测 IL-24 表达 | 第64-67页 |
| 4 实验结果 | 第67-79页 |
| ·病毒扩增及鉴定结果 | 第67-68页 |
| ·流式细胞术筛选合适细胞系 | 第68-69页 |
| ·细胞杀伤实验检测细胞杀伤效果 | 第69-70页 |
| ·子代复制能力实验显示 Ad5/F11 较 Ad5 在淋巴瘤细胞中有较高的复制能力 | 第70-71页 |
| ·Ad5/F11 与 Ad5 腺病毒感染效率实验 | 第71-77页 |
| ·Western blot 显示嵌合型腺病毒在淋巴瘤细胞内能更好地表达外源基因 | 第77-79页 |
| 5 讨论 | 第79-83页 |
| ·肿瘤特异性腺病毒载体系统 | 第79-80页 |
| ·fiber 嵌合型溶瘤腺病毒载体 | 第80页 |
| ·AdCN205-11-IL-24 在体外实验中表现出良好的肿瘤杀伤效果和安全性 | 第80-83页 |
| 6．结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
