| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-20页 |
| 缩略语 | 第20-22页 |
| 1 前言 | 第22-38页 |
| ·肿瘤的基因治疗 | 第22-25页 |
| ·基因治疗的起源 | 第22-23页 |
| ·用于治疗肿瘤的基因 | 第23-24页 |
| ·肿瘤基因治疗的载体 | 第24-25页 |
| ·腺病毒介导的肿瘤治疗 | 第25-26页 |
| ·肿瘤靶向性基因病毒治疗 | 第26-32页 |
| ·溶瘤腺病毒的改造策略 | 第26-31页 |
| ·腺病毒组成结构和活动周期 | 第26-29页 |
| ·提高溶瘤腺病毒载体靶向性策略 | 第29-31页 |
| ·提高外源基因表达能力策略 | 第31页 |
| ·溶瘤腺病毒携带的治疗基因 | 第31-32页 |
| ·溶酶体跨膜蛋白 LAPTM4B 简介 | 第32-34页 |
| ·LAPTM4B 的结构特征 | 第33页 |
| ·LAPTM4B 的分布与生物学特性 | 第33页 |
| ·LPATM4B 与肝癌 | 第33-34页 |
| ·溶瘤腺病毒用于癌症临床治疗进展 | 第34-36页 |
| ·实验方案设计 | 第36-37页 |
| ·课题来源 | 第36页 |
| ·实验目的及意义 | 第36-37页 |
| ·研究内容 | 第37-38页 |
| 2 实验材料 | 第38-48页 |
| ·菌株及质粒 | 第38页 |
| ·工具酶及试剂 | 第38-39页 |
| ·引物设计与合成 | 第39-40页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·腺病毒 | 第40-41页 |
| ·主要仪器与设备 | 第41-42页 |
| ·培养基及细胞培养液 | 第42页 |
| ·主要溶液的配制 | 第42-48页 |
| ·制备感受态细胞用液 | 第42-43页 |
| ·制备质粒用液 | 第43-44页 |
| ·细胞培养辅助用液 | 第44页 |
| ·病毒纯化用液 | 第44-45页 |
| ·Western Blot 用液 | 第45-48页 |
| 3 实验方法 | 第48-70页 |
| ·分子克隆实验方法 | 第48-56页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第48-49页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第49-53页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 DNA 片段 | 第53页 |
| ·腺病毒载体重组 | 第53-56页 |
| ·细胞培养实验方法 | 第56-59页 |
| ·细胞复苏 | 第56页 |
| ·细胞传代 | 第56-57页 |
| ·细胞计数 | 第57-58页 |
| ·细胞冻存 | 第58-59页 |
| ·病毒的包装、扩增、纯化及滴度测定方法 | 第59-64页 |
| ·重组质粒片段制备 | 第59-60页 |
| ·病毒的包装 | 第60-61页 |
| ·病毒的小量扩增及鉴定 | 第61-62页 |
| ·病毒的大量扩增与纯化 | 第62-63页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第63-64页 |
| ·病毒效果实验 | 第64-70页 |
| ·Real-Time PCR 检测子代病毒复制能力 | 第64-65页 |
| ·CCK-8 检测病毒对细胞的杀伤能力 | 第65页 |
| ·检测 AdCN205-GFP 荧光表达 | 第65-66页 |
| ·细胞免疫荧光法检测基因在细胞中分布 | 第66-67页 |
| ·Western Blot 检测 LAPTM4B-24 蛋白表达 | 第67-69页 |
| ·流式细胞术检测 LAPTM4B-24 对细胞周期的影响 | 第69页 |
| ·SCID 鼠皮下 MHCC97H 肝癌移植瘤模型的建立及分组治疗 | 第69-70页 |
| 4 实验结果 | 第70-79页 |
| ·重组腺病毒质粒的鉴定 | 第70页 |
| ·病毒包装、扩增及鉴定结果 | 第70-71页 |
| ·子代病毒具有在肝癌细胞系中选择性复制的能力 | 第71-72页 |
| ·病毒对肝癌细胞有选择性杀伤能力 | 第72-73页 |
| ·病毒在细胞系中可选择性且高效表达外源基因 | 第73-76页 |
| ·AdCN205-GFP 在肝癌细胞中选择性表达绿色荧光 | 第73-74页 |
| ·AdCN205-LAPTMB-24 在肝癌细胞中选择性表达外源基因LAPTM4B-24 | 第74-76页 |
| ·AdCN205-LAPTMB-24 将细胞周期阻滞在 G2期 | 第76-78页 |
| ·病毒能够有效抑制小鼠皮下肝癌移植瘤的生长 | 第78-79页 |
| 5 讨论 | 第79-83页 |
| ·肿瘤靶向性溶瘤腺病毒载体系统 | 第79-80页 |
| ·治疗基因 LAPTM4B-24 的应用 | 第80-81页 |
| ·AdCN205-LAPTM4B-24 具有一定的肿瘤杀伤能力 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 在学期间参与科研项目及发表论文情况 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
