| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-34页 |
| ·鸭病毒性肠炎概述 | 第18-23页 |
| ·病因学及流行病学 | 第18页 |
| ·临床表现 | 第18-19页 |
| ·病理病变 | 第19页 |
| ·DVE 的诊断 | 第19-21页 |
| ·鸭病毒性肠炎的防制 | 第21-23页 |
| ·鸭肠炎病毒生物学特性 | 第23-26页 |
| ·DEV 的分类学地位 | 第23-24页 |
| ·形态特征 | 第24页 |
| ·理化特性 | 第24-25页 |
| ·培养特性 | 第25页 |
| ·抗原性 | 第25页 |
| ·DEV 的形态发生与细胞的超微结构变化 | 第25-26页 |
| ·DEV 分子生物学研究进展 | 第26-27页 |
| ·DEV 基因组序列的测定 | 第26页 |
| ·DEV 基因组结构 | 第26-27页 |
| ·α-疱疹病毒的复制 | 第27-30页 |
| ·病毒吸附并进入宿主细胞 | 第27页 |
| ·脱去外膜的衣壳进入细胞核 | 第27-28页 |
| ·重塑宿主细胞核 | 第28页 |
| ·病毒基因表达 | 第28页 |
| ·病毒DNA 复制 | 第28-29页 |
| ·病毒衣壳包装 | 第29页 |
| ·病毒子释放 | 第29-30页 |
| ·UL15 的基因结构及编码蛋白功能 | 第30-31页 |
| ·病毒宿主关闭蛋白(UL41)的功能 | 第31-33页 |
| ·疱疹病毒诱导宿主关闭的一般特征 | 第31-32页 |
| ·VHS 的作用机理 | 第32页 |
| ·VHS 的生物学功能 | 第32-33页 |
| ·研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 鸭肠炎病毒UL15 基因及其编码蛋白的鉴定 | 第34-68页 |
| ·材料与方法 | 第34-49页 |
| ·病毒与细胞 | 第34页 |
| ·质粒与菌种 | 第34页 |
| ·试剂盒、限制性酶类及主要生化试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-36页 |
| ·DEV 在CEF 上的增殖及滴度测定 | 第36-37页 |
| ·DEV 病毒的纯化 | 第37页 |
| ·CEF 总RNA 的提取 | 第37页 |
| ·RT-PCR 法扩增UL15 基因编码序列 | 第37-38页 |
| ·UL15 基因剪切位点的确定 | 第38页 |
| ·地高辛标记的Northern blot 探针的制备 | 第38页 |
| ·探针标记效率的测定 | 第38-39页 |
| ·RNA 的变性电泳及转膜 | 第39-40页 |
| ·RNA 的固定及Northern 杂交 | 第40-41页 |
| ·DEV 感染CEF 细胞mRNA 的纯化 | 第41-42页 |
| ·5′-cDNA 末端快速扩增(5′-RACE) | 第42-43页 |
| ·3′-cDNA 末端快速扩增(3′-RACE) | 第43-44页 |
| ·DEV UL15 基因的序列分析 | 第44页 |
| ·pET-UL15C~(232) 原核载体的构建 | 第44-45页 |
| ·6×His-UL15C~(232) 融合蛋白在 E.coli 中的表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·兔抗 6×His-UL15C~(232) 抗血清的制备 | 第46页 |
| ·Western blot | 第46页 |
| ·UL15 基因表达时相分析 | 第46-47页 |
| ·UL15 真核表达质粒的构建及中量提取 | 第47-48页 |
| ·UL15 在CEF 细胞上的瞬时表达 | 第48页 |
| ·UL15 基因产物在CEF 细胞中的定位 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-63页 |
| ·DEV 病毒的增殖与纯化结果 | 第49页 |
| ·UL15 RT-PCR 扩增结果 | 第49-50页 |
| ·UL15 Northen 探针的标记结果 | 第50页 |
| ·UL15 Northern blot 结果 | 第50-51页 |
| ·UL15 基因剪切位点的确定 | 第51-52页 |
| ·UL15 基因末端序列的扩增结果 | 第52-53页 |
| ·UL15 基因的序列分析结果 | 第53-58页 |
| ·6×His-UL15C~(232) 融合蛋白抗血清的制备 | 第58-59页 |
| ·Western blot 检测感染细胞内UL15 蛋白的表达 | 第59-60页 |
| ·UL15 基因的表达时相结果 | 第60-61页 |
| ·病毒粒子与兔抗UL15C~(232) 抗血清的反应性 | 第61页 |
| ·UL15 基因在CEF 中的瞬时表达 | 第61-62页 |
| ·UL15 表达产物在CEF 中的亚细胞定位 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-68页 |
| ·DEV UL15 基因结构 | 第63-64页 |
| ·UL15.5 基因的序列分析 | 第64-65页 |
| ·DEV UL15 可能的功能 | 第65页 |
| ·DEV 的分类地位-基于UL15 氨基酸序列的分析 | 第65页 |
| ·UL15C~(232) 的原核表达 | 第65-66页 |
| ·UL15 的表达时序性 | 第66页 |
| ·UL15 在病毒粒子中的存在性 | 第66-67页 |
| ·UL15 在感染细胞中的亚细胞定位 | 第67-68页 |
| 第三章 鸭肠炎病毒UL41 基因及其编码蛋白的鉴定 | 第68-104页 |
| ·材料与方法 | 第68-77页 |
| ·病毒与细胞 | 第68页 |
| ·质粒与菌种 | 第68页 |
| ·试剂盒、限制性酶类及主要生化试剂 | 第68-69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·引物 | 第69-70页 |
| ·DEV UL41 的序列分析 | 第70-71页 |
| ·PCR法扩增UL41及US3基因序列 | 第71页 |
| ·UL41 蛋白的原核表达 | 第71-72页 |
| ·可溶性MBP-VHS 融合蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| ·VHS 底物RNA 的制备 | 第73-74页 |
| ·RNA 的提取及电泳 | 第74页 |
| ·体外VHS 活性检测 | 第74页 |
| ·兔抗GST-UL41 抗血清的制备 | 第74页 |
| ·Western blot | 第74页 |
| ·UL41 基因表达时相分析 | 第74-75页 |
| ·UL41 真核表达质粒的构建及中量提取 | 第75页 |
| ·UL41 在CEF 细胞上的瞬时表达 | 第75页 |
| ·UL41 基因产物在CEF 细胞中的定位 | 第75页 |
| ·UL41 的定点突变 | 第75-76页 |
| ·瞬时表达UL41 的VHS 活性检测 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-100页 |
| ·UL41 序列分析结果 | 第77-84页 |
| ·UL41 及US3的PCR结果 | 第84页 |
| ·UL41 的原核表达 | 第84-86页 |
| ·UL41 的纯化 | 第86-87页 |
| ·US3 体外转录物的制备 | 第87-88页 |
| ·UL41 的体外VHS 活性检测 | 第88页 |
| ·兔抗DEV UL41 血清的反应性 | 第88-89页 |
| ·UL41 在DEV 感染的CEF 中的表达 | 第89-90页 |
| ·UL41 基因的表达时相结果 | 第90-91页 |
| ·Western blot 检测DEV 病毒粒子中的UL41 | 第91页 |
| ·UL41 在感染细胞中的亚细胞定位 | 第91-92页 |
| ·UL41 的瞬时表达及其VHS 活性的测定 | 第92-94页 |
| ·UL41 突变体表达载体的构建及瞬时表达 | 第94-96页 |
| ·定点突变的UL41 VHS 活性检测 | 第96-97页 |
| ·保守性氨基酸位点的功能分析 | 第97-100页 |
| ·讨论 | 第100-104页 |
| ·DEV UL41 的序列分析 | 第100页 |
| ·DEV 的分类地位-基于UL41 的分析 | 第100页 |
| ·UL41 的可溶性表达及纯化 | 第100-101页 |
| ·UL41 表达的时序性 | 第101页 |
| ·UL41 是病毒粒子的组成部分 | 第101-102页 |
| ·UL41 在感染细胞中的分布 | 第102页 |
| ·UL41 的VHS 活性 | 第102-103页 |
| ·VHS 活性的关键位点 | 第103-104页 |
| 第四章 全文结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 作者简历 | 第119页 |
