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转基因马铃薯表达口蹄疫病毒表面抗原融合蛋白CTB-VP1的分离、纯化与检测

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
缩略语中英文对照第8-12页
1 引言第12-22页
   ·口蹄疫病毒分子生物学简介第12-13页
   ·口蹄疫疫苗研究进展第13-14页
     ·灭活疫苗第13-14页
     ·弱毒疫苗第14页
     ·口蹄疫新型疫苗第14页
   ·口蹄疫植物疫苗的研究现状第14-16页
     ·口蹄疫植物疫苗研究进展第14-15页
     ·口蹄疫植物疫苗研究存在的问题第15-16页
   ·不同表达体系生产重组蛋白的研究进展第16-18页
     ·微生物和动物细胞生产重组蛋白的研究进展第16-17页
     ·转基因植物生产药用蛋白的研究进展第17-18页
   ·蛋白分离纯化的一般程序第18-20页
     ·生物材料的破碎及适当的提取缓冲液的选择第18-19页
     ·蛋白组分的沉淀及浓缩第19页
     ·利用层析技术分离蛋白第19-20页
     ·纯化蛋白的纯度鉴定与保存第20页
   ·研究目的和意义第20-22页
2 转基因马铃薯表达CTB-VP1融合蛋白的验证第22-27页
   ·材料与方法第22-26页
     ·植物材料第22-23页
     ·仪器与试剂第23页
     ·试剂配制第23-25页
     ·SDS-PAGE垂直板电泳第25页
     ·Western blotting操作方法第25-26页
   ·结果第26页
   ·小结第26-27页
3 转CTB-VP1马铃薯离体快繁与微型薯诱导培养技术的研究第27-33页
   ·材料与方法第27-28页
     ·植物材料第27页
     ·转CTB-VP1马铃薯的快繁第27页
     ·微型薯的诱导第27-28页
     ·组培苗的移栽与微型薯的生产第28页
     ·组培苗的离体保存第28页
   ·结果与讨论第28-32页
     ·植物生长调节剂对转CTB-VP1马铃薯组培苗生长的影响第28-29页
     ·不同培养基成分及培养方式对诱导微型薯的影响第29-30页
     ·转CTB-VP1马铃薯组培苗的移栽与微型薯的生产第30-31页
     ·转CTB-VP1马铃薯的离体保存第31-32页
   ·小结第32-33页
4 转CTB-VP1马铃薯总蛋白的提取与测定第33-41页
   ·材料与方法第33-35页
     ·植物材料第33页
     ·仪器与试剂第33页
     ·试剂配制第33-34页
     ·考马斯亮蓝法测蛋白质浓度第34页
     ·不同材料破碎方法的比较第34页
     ·不同缓冲液提取总蛋白的效果比较第34-35页
     ·缓冲液不同pH值提取效果比较第35页
     ·缓冲液不同体积浸提效果比较第35页
     ·不同组织器官总蛋白的提取及SDS-PAGE分析第35页
   ·结果与讨论第35-40页
     ·蛋白含量标准曲线的绘制第35-36页
     ·不同组织破碎方法提取总蛋白的效果比较第36-37页
     ·总蛋白提取缓冲液的选择第37页
     ·总蛋白提取缓冲液pH值的选择第37-38页
     ·缓冲液不同体积提取效果比较第38页
     ·不同组织器官总蛋白的SDS-PAGE分析第38-40页
   ·小结第40-41页
5 转基因马铃薯表达CTB-VP1融合蛋白的分离与纯化第41-59页
   ·材料与方法第41-45页
     ·植物材料第41页
     ·仪器与试剂第41-42页
     ·试剂配制第42页
     ·硫酸铵分级沉淀蛋白第42页
     ·去盐第42-43页
     ·离子交换层析分离纯化技术第43-44页
       ·基本操作过程第43页
       ·离子交换层析中缓冲液pH值的选择第43-44页
       ·离子交换层析中洗脱条件的选择第44页
     ·浓缩方法的选择第44页
     ·凝胶过滤层析第44-45页
   ·结果与讨论第45-57页
     ·总蛋白提取物的硫酸铵分级沉淀第45-47页
     ·去盐第47-48页
       ·透析去盐第47页
       ·Sephadex G-50去盐第47-48页
     ·离子交换层析第48-55页
       ·离子交换层析缓冲液pH值的确定第48-51页
       ·离子交换层析洗脱条件的确定第51-55页
     ·层析收集液的浓缩及去盐第55页
     ·凝胶过滤层析第55-57页
   ·小结第57-59页
6 纯化产物CTB-VP1融合蛋白的免疫抗体水平检测第59-64页
   ·材料与方法第59-61页
     ·材料第59-60页
     ·仪器与试剂第60页
     ·疫苗的制备及免疫注射第60页
     ·免疫后抗血清的制备第60页
     ·正向间接血凝试验第60-61页
   ·结果与讨论第61-63页
   ·小结第63-64页
7 结论第64-66页
图版第66-68页
参考文献第68-71页
个人简介第71-72页
导师简介第72-73页
获得成果目录清单第73-74页
致谢第74页

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