| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| 1 果胶和果胶酶 | 第10-19页 |
| ·果胶类多糖 | 第10-12页 |
| ·果胶酶 | 第12-17页 |
| ·原果胶酶 | 第14页 |
| ·果胶酸水解酶 | 第14-15页 |
| ·果胶酯酶 | 第15-16页 |
| ·果胶酸盐裂解酶 | 第16-17页 |
| ·果胶酶的工业应用 | 第17-19页 |
| 2 大肠杆菌表达系统 | 第19-22页 |
| ·表达系统 | 第19-20页 |
| ·表达载体 | 第20-22页 |
| 3 本文的研究内容及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 不同表达载体改善一种番茄果胶酸盐裂解酶重组表达的研究 | 第23-50页 |
| 第一节 材料与方法 | 第23-32页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·番茄种子 | 第23页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| 2 主要试剂及来源 | 第24-25页 |
| 3 主要仪器设备及其来源 | 第25-26页 |
| 4 方法 | 第26-32页 |
| ·番茄基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳后割胶回收DNA片段 | 第27页 |
| ·碱裂解法抽提质粒 | 第27页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·DNA连接反应 | 第28页 |
| ·感受态细胞的热激转化和稀释涂布 | 第28页 |
| ·重组菌的筛选和鉴定 | 第28页 |
| ·重组菌的培养和诱导表达 | 第28页 |
| ·粗蛋白的制备和包涵体的洗涤 | 第28-29页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| ·聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-31页 |
| ·亲和层析纯化带有Histag标签的目的蛋白 | 第31页 |
| ·双键法测定P56蛋白裂解酶活性 | 第31-32页 |
| 第二节 目的基因cDNA(L56)的克隆 | 第32-40页 |
| 1 目的基因的序列 | 第32页 |
| 2 引物设计与合成 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·引物合成 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·番茄基因组DNA琼脂糖凝胶电泳结果 | 第33-34页 |
| ·PCR与overlap-PCR克隆目的基因的cDNA | 第34-37页 |
| ·测序结果 | 第37-40页 |
| 第三节 重组质粒PET 28a(+)／L56的构建及重组菌PET28a(+)／L56／Tuner和PET28a(+)／L56／BL21的诱导表达 | 第40-43页 |
| 1 重组质粒PET 28a(+)／L56的构建 | 第40页 |
| 2 重组菌PET28a(+)／L56／Tuner的构建和诱导表达 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第40-41页 |
| 3 重组菌PET28a(+)／L56／BL21的构建和诱导表达 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四节 重组质粒PET32a(+)／L56的构建及重组菌PET32a(+)／L56／B21的诱导表达 | 第43-45页 |
| 1 重组质粒PET32a(+)／L56的构建 | 第43页 |
| 2 重组菌PET32a(+)／L56／B21的构建和诱导表达 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五节 重组质粒PET43.1b(+)／L56的构建及重组菌PET43.1b(+)／L56／BL21的诱导表达 | 第45-50页 |
| 1 引物设计及L56的克隆 | 第45-46页 |
| 2 重组质粒PET43.1b(+)／L56的构建 | 第46页 |
| 3 重组菌PET43.1b(+)／L56／BL21的构建和诱导表达 | 第46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 ESP酵母表达系统表达P56初试 | 第50-66页 |
| 第一节 材料与方法 | 第50-54页 |
| 1 材料 | 第50-52页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·质粒 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50-52页 |
| 2 主要试剂及来源 | 第52页 |
| 3 主要仪器设备及其来源 | 第52页 |
| 4 方法 | 第52-54页 |
| ·SP-Q01感受态细胞制备 | 第52-53页 |
| ·SP-Q01感受态细胞的热激转化和稀释涂布 | 第53页 |
| ·重组菌的鉴定 | 第53页 |
| ·重组菌的培养和诱导表达 | 第53-54页 |
| ·重组菌的破碎和粗蛋白的制备 | 第54页 |
| 第二节 重组质粒pESP-3／L56的构建及重组菌pESP3／L56／SP-Q01的诱导表达 | 第54-66页 |
| 1 重组质粒pESP-3／L56的构建 | 第54页 |
| 2 重组菌pESP-3／L56／SP-Q01的构建和诱导表达 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-66页 |
| 主要结论 | 第66-67页 |
| 附录1： | 第67-76页 |
| 附录2： | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
