| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号与缩略语说明 | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-20页 |
| ·精氨酸酶的分布及性质 | 第8-10页 |
| ·精氨酸酶在自然界中的分布 | 第8页 |
| ·精氨酸酶在生物体内的分布及性质 | 第8-10页 |
| ·精氨酸酶在肿瘤治疗领域的应用 | 第10-11页 |
| ·精氨酸酶的生产现状 | 第11-12页 |
| ·传统方法 | 第11页 |
| ·基因工程方法 | 第11-12页 |
| ·外源蛋白的基因工程表达系统 | 第12-18页 |
| ·表达系统的选择 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第14-18页 |
| ·本论文的立题依据及研究内容 | 第18-20页 |
| ·立题依据 | 第18页 |
| ·主要研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料和试剂 | 第20-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第22-25页 |
| 3 人Ⅰ型精氨酸酶基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第25-43页 |
| ·表达载体构建策略 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·人Ⅰ型精氨酸酶基因的RT-PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第27-29页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·酵母表达质粒电转化酵母宿主菌SMD1168 | 第30页 |
| ·酵母重组子的筛选鉴定 | 第30-31页 |
| ·酵母重组子的诱导表达(Mut~s表型) | 第31-32页 |
| ·表达产物的酶活测定 | 第32-33页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-41页 |
| ·目的基因的RT-PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·hA Ⅰ基因TA克隆的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·测序结果分析 | 第35-36页 |
| ·酵母表达质粒的构建与线性化 | 第36-37页 |
| ·毕赤酵母电转化及重组子的筛选鉴定 | 第37-38页 |
| ·诱导表达产物的酶活测定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·展望 | 第41-43页 |
| 4 人Ⅰ型精氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-51页 |
| ·表达载体构建策略 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·PCR引物设计及目的基因扩增 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建及检验 | 第44-45页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第45页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·细胞壁的破碎 | 第45页 |
| ·表达产物分析 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-49页 |
| ·目的基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第46页 |
| ·表达产物的酶活测定 | 第46-47页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第47页 |
| ·发酵条件优化 | 第47-49页 |
| ·展望 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌和毕赤酵母两种表达体系表达结果的比较分析 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 附录A | 第52-53页 |
| 附录B | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第61页 |