| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 综述一 鸡病毒性关节炎研究进展 | 第13-20页 |
| 1 病毒性关节炎简介 | 第13页 |
| 2 病原学 | 第13-14页 |
| ·病毒的分类及形态结构 | 第13-14页 |
| ·病毒的理化特性 | 第14页 |
| ·病毒血清型 | 第14页 |
| 3 病毒的基因组 | 第14-15页 |
| 4. 病毒的蛋白 | 第15-16页 |
| ·结构蛋白 | 第15-16页 |
| ·非结构蛋白 | 第16页 |
| 5 流行病学 | 第16-17页 |
| 6 临床症状 | 第17页 |
| 7 病理变化 | 第17页 |
| 8 诊断 | 第17-18页 |
| 9 疫苗研究 | 第18-19页 |
| ·弱毒苗 | 第18页 |
| ·油乳剂灭活苗 | 第18页 |
| ·ARV基因工程疫苗 | 第18-19页 |
| 10 防制 | 第19-20页 |
| 综述二 减毒沙门氏菌简介 | 第20-22页 |
| 1 减毒沙门氏菌的减毒机理 | 第20页 |
| 2 减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的优点 | 第20-21页 |
| 3 减毒沙门氏菌入侵机制及免疫应答机理 | 第21页 |
| 4 减毒沙门氏菌在疫苗研究中的应用 | 第21-22页 |
| 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验研究 | 第23-58页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·试验动物 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-39页 |
| ·ARV ΣB基因的克隆及原核表达质粒的构建 | 第24-31页 |
| ·ARV σB σC蛋白基因的扩增 | 第24-26页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·ARV RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·ARV σB基因的RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·σB基因的克隆与鉴定 | 第26-31页 |
| ·DH 5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·ARV σB基因的克隆与鉴定 | 第26-29页 |
| ·ARV σB基因的核苷酸序列测定与分析 | 第29页 |
| ·σB基因原核表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·σB蛋白的表达 | 第30-31页 |
| ·ARVΣB基因与ΣC基因真核表达质粒的构建 | 第31-34页 |
| ·真核表达质粒pVAX-σB的构建 | 第31-32页 |
| ·σB与真核表达质粒pVAX 1.0的酶切 | 第31页 |
| ·酶切产物的连接 | 第31-32页 |
| ·ARVσB基因真核表达质粒的酶切及PCR鉴定 | 第32页 |
| ·ARVσB基因σC基因双顺反子真核表达质粒pVAXAB-σB-σC的构建 | 第32-34页 |
| ·中间质粒pVAXAB-σC的构建 | 第32-34页 |
| ·真核表达质粒pVAXAB-σB-σC的构建 | 第34页 |
| ·ARVΣB基因ΣC基因双顺反子真核表达质粒的体外表达 | 第34-36页 |
| ·去内毒素质粒抽提 | 第34-35页 |
| ·COS-7细胞的转染 | 第35-36页 |
| ·细胞复苏 | 第35页 |
| ·细胞传代 | 第35-36页 |
| ·转染方法 | 第36页 |
| ·免疫荧光检测蛋白表达情况 | 第36页 |
| ·减毒沙门氏菌介导的ARVΣB、ΣC基因疫苗的构建 | 第36-37页 |
| ·减毒沙门氏菌SL7207感受态的制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pVAX1-σB、pVAXAB-σB-σC电转化感受态SL7207及其鉴定 | 第37页 |
| ·重组沙门氏菌介导的ARVΣB、ΣC基因疫苗的免疫特性实验 | 第37-39页 |
| ·重组沙门氏菌的体内稳定性实验 | 第37页 |
| ·重组沙门氏菌的安全性实验 | 第37-38页 |
| ·重组减毒沙门氏菌介导的ARVσB基因疫苗的免疫原性实验 | 第38-39页 |
| ·重组减毒沙门氏菌介导的ARVσB疫苗的制备 | 第38页 |
| ·重组沙门氏菌介导的ARVσB、σC基因疫苗的免疫特性实验 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-54页 |
| ·ARV σB基因的RT-PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| ·ARV σB基因重组质粒pMD19T-σB的鉴定 | 第40-42页 |
| ·σB基因原核表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·σB蛋白的初步表达 | 第43-45页 |
| ·σB蛋白的初步表达 | 第43页 |
| ·σB蛋白的诱导条件的优化 | 第43-44页 |
| ·σB蛋白的免疫印记分析 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pVAX-σB的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pVAXAB-σB-σC的鉴定 | 第46-49页 |
| ·ARV σC基因重组质粒pMD19T-σC的鉴定 | 第46-47页 |
| ·中间质粒pVAXAB-σC的鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·双顺反子真核表达质粒pVAXAB-σB-σC的鉴定 | 第48-49页 |
| ·真核表达质粒pVAX-σB、pVAX-σC、pVAXAB-σB-σC的体外表达结果 | 第49-50页 |
| ·减毒沙门氏菌介导的ARV σB、σC基因疫苗的构建 | 第50-51页 |
| ·重组沙门氏菌的体内稳定性实验 | 第51页 |
| ·重组沙门氏菌的安全性实验 | 第51页 |
| ·重组沙门氏菌介导的ARV σB、σC基因疫苗的免疫特性实验 | 第51-54页 |
| ·血清IgG的检测 | 第51-53页 |
| ·肠粘膜IgA抗体的检测 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第67页 |
