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结缕草组织培养再生体系建立及转基因研究

第一章 前言第1-20页
   ·引言第8-9页
   ·文献综述第9-16页
     ·结缕草再生体系的建立第9-11页
       ·以成熟胚为外植体的再生体系建立第10-11页
       ·以幼穗、幼果、匍匐茎等为外植体的再生体系建立第11页
     ·结缕草遗传转化第11-14页
       ·原生质体转化法第11-12页
       ·农杆菌介导转化法第12-13页
       ·基因枪法第13-14页
     ·结缕草应用生物技术培育新品种的研究第14-16页
     ·应用转基因技术培育结缕草新品种所要解决的问题第16页
       ·建立结缕草高效再生体系第16页
       ·加强结缕草遗传转化系统的研究第16页
   ·CBF1及PSAG12-IPT基因功能第16-18页
   ·存在问题与展望第18页
   ·本研究的目的和意义第18-20页
第二章 成熟胚为外植体的结缕草组织培养再生体系的建立第20-30页
   ·材料与方法第20页
     ·结缕草材料第20页
   ·方法第20-21页
     ·愈伤组织诱导第20页
     ·愈伤组织的继代第20页
     ·诱导分化第20-21页
     ·植株再生第21页
     ·植株移栽第21页
   ·结果与分析第21-25页
     ·结缕草愈伤组织诱导第21-23页
       ·去除外稃与不去外稃成熟胚愈伤组织的比较研究第21页
       ·不同2,4-D浓度对成熟胚愈伤组织诱导的影响第21-22页
       ·脯氨酸对愈伤的作用第22-23页
     ·不同ABA浓度继代培养基对结缕草成熟胚愈伤组织状态及分化能力的影响第23页
     ·不同继代培养基对胚性愈伤组织发生的影响第23-24页
     ·不同激素配比对胚性愈伤组织分化的影响第24-25页
   ·问题与讨论第25-30页
     ·结缕草种子的消毒与处理第25-26页
     ·渗透压对愈伤组织诱导的影响第26页
     ·脯氨酸愈伤组织诱导的影响第26-27页
     ·结缕草愈伤组织继代中愈伤状态的调整第27页
     ·关于外源激素的作用第27-29页
       ·2,4-D第27-28页
       ·6-BA第28页
       ·ABA第28-29页
     ·结缕草下胚轴建立植株再生体系的可能性第29-30页
第三章 结缕草遗传转化体系的建立及转耐寒、抗衰老基因研究第30-55页
   ·基因枪转化法第30-41页
     ·实验材料第30页
     ·转化所用的重组质粒(图13)第30页
     ·仪器设备和所用试剂第30-31页
     ·培养基的名称及配方第31页
     ·实验方法第31-37页
       ·受体准备第31-34页
       ·筛选的压的确定第34页
       ·转化体筛选和植株再生第34页
       ·转基因植株的分子检测(PCR及RT-PCR检测)第34-37页
     ·结果与分析第37-38页
       ·除草剂Glufosinate愈伤组织选择压的确定第37-38页
       ·再生苗筛选压的确定第38页
     ·问题与讨论第38-41页
       ·结缕草的遗传转化受体第38页
       ·影响结缕草基因枪法转化效率的第38-40页
       ·共转化第40-41页
   ·农杆菌介导法第41-50页
     ·实验材料第41页
     ·双元表达载体构建第41页
     ·实验方法第41-46页
       ·重组质粒DNA的提取和纯化(3 .1.6.1.1)第41-42页
       ·P3301-IPT-Nos质粒转化农杆菌菌株第42-44页
       ·农杆菌介导的结缕草的转化第44-45页
       ·转化方法的优化第45-46页
       ·转化体筛选和植株再生第46页
       ·分子检测(PCR及RT-PCR检测)(同3.1.6.5)第46页
     ·结果与分析第46-49页
       ·构建双元表达载体P3301-IPT-Nos第46-47页
       ·转化方法的优化第47-49页
     ·农杆菌转化的抗性筛选及抗性愈伤组织分化苗第49-50页
   ·转基因植株的分子检测结果第50-51页
     ·转基因植株的PCR检测第50页
     ·转基因植株的RT-PCR检测第50-51页
   ·问题与讨论第51-55页
     ·结缕草遗传转化中存在的问题第51-52页
     ·提高转化效率的途径第52-53页
       ·受体系统的完善第52页
       ·AS(乙酞丁香酮)对转化的影响第52页
       ·转化后恢复培养第52页
       ·抗性愈伤的筛选第52-53页
       ·提高抗性愈伤出苗率的措施第53页
     ·基因枪法与农杆菌介导法的比较第53-55页
第四章 结论第55-61页
附图说明第61-62页
参考文献第62-68页
缩写词第68-69页
致谢第69页

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