| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立 | 第11-36页 |
| 第一节 概述 | 第11-21页 |
| §1.1 糖尿病慢性并发症 | 第11-16页 |
| §1.1.1 醛糖还原酶催化的多元醇旁路的激活 | 第12-14页 |
| §1.1.2 蛋白激酶C(PKC)激活 | 第14-15页 |
| §1.1.3 蛋白质非酶糖基化 | 第15-16页 |
| §1.1.4 脂质、蛋白质代谢紊乱 | 第16页 |
| §1.2 糖尿病并发症治疗药物的研究与开发现状 | 第16-18页 |
| §1.3 本课题的研究目的及意义 | 第18-21页 |
| 第二节 醛糖还原酶抑制剂筛选模型建立 | 第21-32页 |
| §2.1 平滑肌细胞培养和鉴定 | 第21-24页 |
| §2.1.1 实验动物、实验器材、实验试剂 | 第21页 |
| §2.1.2 平滑肌细胞原代培养操作方法与步骤 | 第21-23页 |
| §2.1.3 培养结果及鉴定 | 第23-24页 |
| §2.2 醛糖还原酶活性及醛糖还原酶mRNA表达测定方法 | 第24-26页 |
| §2.2.1 实验器材、实验试剂 | 第24页 |
| §2.2.2 醛糖还原酶活性测定方法 | 第24-25页 |
| §2.2.3 醛糖还原酶mRNA水平测定-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第25-26页 |
| §2.3 促使VSMC细胞内AR高活性最适孵育时间的确定 | 第26-28页 |
| §2.3.1 实验器材、实验试剂 | 第26-27页 |
| §2.3.2 细胞处理及实验分组 | 第27页 |
| §2.3.3 实验结果 | 第27-28页 |
| §2.4 促使VSMC细胞内AR高活性的最佳葡萄糖浓度的确定 | 第28-30页 |
| §2.4.1 实验器材、实验试剂 | 第28-29页 |
| §2.4.2 细胞处理及实验分组 | 第29页 |
| §2.4.3 实验结果 | 第29-30页 |
| §2.5 阳性药依帕司对模型AR活性的影响 | 第30-32页 |
| §2.5.1 实验器材、实验试剂 | 第30-31页 |
| §2.5.2 细胞处理及分组 | 第31页 |
| §2.5.3 实验结果 | 第31-32页 |
| 第三节 基于模型的相关药物筛选 | 第32-35页 |
| §3.1 含药血清筛选 | 第32-33页 |
| §3.1.1 含药血清的制备 | 第32页 |
| §3.1.2 细胞分组与处理 | 第32页 |
| §3.1.3 含药血清筛选结果 | 第32-33页 |
| §3.2 中药单体的筛选 | 第33-35页 |
| §3.2.1 细胞分组与处理 | 第33-34页 |
| §3.2.2 筛选结果 | 第34-35页 |
| 第四节 分析与讨论 | 第35-36页 |
| 第二章 黄芪甲苷对平滑肌细胞增殖的抑制作用及相关机制研究 | 第36-78页 |
| 第一节 概述 | 第36-55页 |
| §1.1 血管平滑肌细胞的生物学功能 | 第37-38页 |
| §1.2 平滑肌细胞增殖与动脉粥样硬化的关系 | 第38-41页 |
| §1.3 平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化的关系 | 第41-47页 |
| §1.3.1 VSMC凋亡与AS | 第41-43页 |
| §1.3.2 VSMC凋亡的信号传递与基因调控 | 第43-47页 |
| §1.4 平滑肌增殖和凋亡及相关机制探讨方法 | 第47-55页 |
| §1.4.1 细胞增殖活力检测方法(WST) | 第47-48页 |
| §1.4.2 细胞凋亡检测的相关方法 | 第48-50页 |
| §1.4.3 细胞内钙离子检测的相关方法 | 第50-55页 |
| 第二节 黄芪甲苷对平滑肌细胞生长的抑制作用及相关机制研究 | 第55-71页 |
| §2.1 前言 | 第55页 |
| §2.2 黄芪甲苷对平滑肌细胞增殖活力的影响 | 第55-57页 |
| §2.2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| §2.2.2 细胞分组及增殖活力检测 | 第56页 |
| §2.2.3 结果统计 | 第56-57页 |
| §2.2.4 实验结果 | 第57页 |
| §2.3 黄芪甲苷对平滑肌细胞凋亡的影响 | 第57-61页 |
| §2.3.1 实验材料 | 第57-58页 |
| §2.3.2 细胞处理与分组及凋亡检测 | 第58-59页 |
| §2.3.3 黄芪甲苷对平滑肌细胞凋亡的影响 | 第59-61页 |
| §2.4 凋亡相关基因Fas和Bcl-2表达的检测 | 第61-64页 |
| §2.4.1 实验材料 | 第61页 |
| §2.4.2 实验操作与步骤 | 第61-62页 |
| §2.4.3 实验结果 | 第62-64页 |
| §2.5 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞内钙离子浓度的影响 | 第64-67页 |
| §2.5.1 实验材料 | 第64-65页 |
| §2.5.2 细胞处理及细胞内钙离子检测 | 第65-66页 |
| §2.5.3 黄芪甲苷对平滑肌细胞细胞内ca~(2+)的影响 | 第66-67页 |
| §2.6 黄芪甲苷对平滑肌细胞一氧化氮的影响 | 第67-71页 |
| §2.6.1 实验材料 | 第67-68页 |
| §2.6.2 细胞处理及细胞内NO检测 | 第68-69页 |
| §2.6.3 实验结果 | 第69-71页 |
| 第三节 分析与讨论 | 第71-78页 |
| §3.1 黄芪甲苷抑制平滑肌细胞增殖及机制 | 第71-73页 |
| §3.1.1 AR与平滑肌细胞增殖 | 第71-72页 |
| §3.1.2 NO与平滑肌细胞增殖 | 第72-73页 |
| §3.2 黄芪甲苷诱导平滑肌细胞凋亡及机制 | 第73-78页 |
| §3.2.1 NO与平滑肌细胞凋亡 | 第73-75页 |
| §3.2.2 钙离子与平滑肌细胞凋亡 | 第75页 |
| §3.2.3 Fas与平滑肌细胞凋亡 | 第75-76页 |
| §3.2.4 Bcl-2与平滑肌细胞凋亡 | 第76-78页 |
| 总结与展望 | 第78-80页 |
| 1、研究工作总结 | 第78页 |
| 2、进一步的工作展望 | 第78-80页 |
| 博士期间相关论文发表情况 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
