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果实特异性表达载体构建与功能鉴定

英文缩略表第1-8页
中文摘要第8-10页
1 引言第10-19页
 1.1 高等植物组织特异启动子研究进展第10-18页
  1.1.1 叶片特异表达启动子第10-11页
  1.1.2 种子特异表达启动子第11-13页
  1.1.3 花药、花粉特异表达启动子第13-14页
  1.1.4 根特异启动子第14-15页
  1.1.5 维管束特异表达启动子第15-17页
  1.1.6 果实特异表达启动子第17-18页
 1.2 本课题研究的意义第18-19页
2 材料与方法第19-36页
 2.1 植物材料第19-21页
  2.1.1 菌株质粒第19-20页
  2.1.2 酶与生化试剂第20页
  2.1.3 PCR引物第20-21页
 2.2 实验方法第21-36页
  2.2.1 基因组DNA的提取第21-22页
   2.2.1.1 CTAB法提取番茄/烟草基因组总DNA第21-22页
   2.2.1.2 总DNA提取产物的纯化第22页
  2.2.2 2A11基因启动子的分离第22-29页
   2.2.2.1 2A11基因启动子的PCR扩增第23页
   2.2.2.2 2A11基因启动子4个正向片段的PCR扩增第23-24页
   2.2.2.3 目的片段的连接第24页
   2.2.2.4 感受态细胞制备第24-25页
   2.2.2.5 转化第25页
   2.2.2.6 碱法小量提取质粒DNA第25-26页
   2.2.2.7 大量提取质粒DNA第26-28页
   2.2.2.8 克隆载体质粒DNA的酶切鉴定第28-29页
   2.2.2.9 序列测定第29页
  2.2.3 植物表达载体的构建第29-31页
  2.2.4 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化第31-32页
   2.2.4.1 感受态细胞的制备第31页
   2.2.4.2 冻融法转化农杆菌第31-32页
  2.2.5 农杆菌介导转化烟草第32-34页
   2.2.5.1 农杆菌的培养第32页
   2.2.5.2 烟草的转化第32-34页
  2.2.6 转基因烟草PCR检测第34页
  2.2.7 转基因烟草的GUS活性分析第34-36页
   2.2.7.1 GUS基因表达的组织化学检测第34页
   2.2.7.2 GUS基因表达的定量分析第34-36页
3 结果与分析第36-49页
 3.1 2A11基因启动子的分离第36-37页
 3.2 2A11启动子内四个果实特异性片段的克隆第37-39页
 3.3 嵌套PCR扩增第39-40页
 3.4 2A111.8kb启动子序列与F1、F2、F3和F4序列第40-41页
 3.5 植物表达载体的构建第41-43页
 3.6 五个表达载体具体分布图第43-44页
 3.7 根癌农杆菌的转化第44页
 3.8 转基因烟草的获得及检测第44-45页
 3.9 烟草果实(子房)发育进程第45页
 3.10 转基因烟草GUS基因表达的组织化学检测第45-46页
 3.11 GUS基因表达的定量分析第46-48页
 3.12 各表达载体间GUS酶活差异性分析第48页
 3.13 各表达载体间GUS酶活比拟性分析第48-49页
4 讨论第49-56页
 4.1 组织特异性启动子与果实特异性基因第49-51页
 4.2 番茄果实特异性启动子2A11功能分析第51-54页
 4.3 增强子片段特性分析第54-56页
5 结论第56-57页
参考文献第57-63页
致谢第63页

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