英文缩略表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
1 引言 | 第10-19页 |
1.1 高等植物组织特异启动子研究进展 | 第10-18页 |
1.1.1 叶片特异表达启动子 | 第10-11页 |
1.1.2 种子特异表达启动子 | 第11-13页 |
1.1.3 花药、花粉特异表达启动子 | 第13-14页 |
1.1.4 根特异启动子 | 第14-15页 |
1.1.5 维管束特异表达启动子 | 第15-17页 |
1.1.6 果实特异表达启动子 | 第17-18页 |
1.2 本课题研究的意义 | 第18-19页 |
2 材料与方法 | 第19-36页 |
2.1 植物材料 | 第19-21页 |
2.1.1 菌株质粒 | 第19-20页 |
2.1.2 酶与生化试剂 | 第20页 |
2.1.3 PCR引物 | 第20-21页 |
2.2 实验方法 | 第21-36页 |
2.2.1 基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
2.2.1.1 CTAB法提取番茄/烟草基因组总DNA | 第21-22页 |
2.2.1.2 总DNA提取产物的纯化 | 第22页 |
2.2.2 2A11基因启动子的分离 | 第22-29页 |
2.2.2.1 2A11基因启动子的PCR扩增 | 第23页 |
2.2.2.2 2A11基因启动子4个正向片段的PCR扩增 | 第23-24页 |
2.2.2.3 目的片段的连接 | 第24页 |
2.2.2.4 感受态细胞制备 | 第24-25页 |
2.2.2.5 转化 | 第25页 |
2.2.2.6 碱法小量提取质粒DNA | 第25-26页 |
2.2.2.7 大量提取质粒DNA | 第26-28页 |
2.2.2.8 克隆载体质粒DNA的酶切鉴定 | 第28-29页 |
2.2.2.9 序列测定 | 第29页 |
2.2.3 植物表达载体的构建 | 第29-31页 |
2.2.4 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化 | 第31-32页 |
2.2.4.1 感受态细胞的制备 | 第31页 |
2.2.4.2 冻融法转化农杆菌 | 第31-32页 |
2.2.5 农杆菌介导转化烟草 | 第32-34页 |
2.2.5.1 农杆菌的培养 | 第32页 |
2.2.5.2 烟草的转化 | 第32-34页 |
2.2.6 转基因烟草PCR检测 | 第34页 |
2.2.7 转基因烟草的GUS活性分析 | 第34-36页 |
2.2.7.1 GUS基因表达的组织化学检测 | 第34页 |
2.2.7.2 GUS基因表达的定量分析 | 第34-36页 |
3 结果与分析 | 第36-49页 |
3.1 2A11基因启动子的分离 | 第36-37页 |
3.2 2A11启动子内四个果实特异性片段的克隆 | 第37-39页 |
3.3 嵌套PCR扩增 | 第39-40页 |
3.4 2A111.8kb启动子序列与F1、F2、F3和F4序列 | 第40-41页 |
3.5 植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
3.6 五个表达载体具体分布图 | 第43-44页 |
3.7 根癌农杆菌的转化 | 第44页 |
3.8 转基因烟草的获得及检测 | 第44-45页 |
3.9 烟草果实(子房)发育进程 | 第45页 |
3.10 转基因烟草GUS基因表达的组织化学检测 | 第45-46页 |
3.11 GUS基因表达的定量分析 | 第46-48页 |
3.12 各表达载体间GUS酶活差异性分析 | 第48页 |
3.13 各表达载体间GUS酶活比拟性分析 | 第48-49页 |
4 讨论 | 第49-56页 |
4.1 组织特异性启动子与果实特异性基因 | 第49-51页 |
4.2 番茄果实特异性启动子2A11功能分析 | 第51-54页 |
4.3 增强子片段特性分析 | 第54-56页 |
5 结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-63页 |
致谢 | 第63页 |