| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·毕赤酵母基因表达系统 | 第7-9页 |
| ·毕赤酵母的生物学特性 | 第7页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第7-8页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第8-9页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第9页 |
| ·长效药物研究进展 | 第9-11页 |
| ·长效药物研究背景 | 第9-10页 |
| ·常用长效药物研究技术 | 第10-11页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第11-14页 |
| ·稀有密码子 | 第11页 |
| ·外源基因的内在特性 | 第11-12页 |
| ·基因的拷贝数 | 第12页 |
| ·培养条件 | 第12-13页 |
| ·蛋白酶的降解 | 第13-14页 |
| ·本课题来源和研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 营养及环境条件对融合蛋白hIFNβ-HSA 表达的影响 | 第15-31页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·材料与方法 | 第15-18页 |
| ·菌种 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器和设备 | 第16页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第16-17页 |
| ·培养方法 | 第17页 |
| ·hIFNβ-HSA 的测定 | 第17页 |
| ·表达过程中的单因素影响 | 第17页 |
| ·采用响应面分析方法优化表达的实验设计 | 第17-18页 |
| ·结果与讨论 | 第18-29页 |
| ·pH 值对hIFNβ-HSA 表达的影响 | 第18-19页 |
| ·有机氮源的添加对hIFNβ-HSA 表达的影响 | 第19-20页 |
| ·不同氨基酸的添加对hIFNβ-HSA 表达的影响 | 第20-21页 |
| ·Glu、Ala、Arg 的添加对hIFNβ-HSA 表达的影响 | 第21-22页 |
| ·蛋白酶抑制剂的选择 | 第22-23页 |
| ·最佳提高融合蛋白表达量的模型验证 | 第23-29页 |
| ·本章主要结论 | 第29-31页 |
| 第三章 降解hIFNβ-HSA 的毕赤酵母蛋白酶的鉴定 | 第31-43页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料与方法 | 第31-35页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器和设备 | 第32页 |
| ·常用试剂的配制 | 第32页 |
| ·培养方法 | 第32-33页 |
| ·hIFNβ-HSA 的SDS-PAGE 检测 | 第33-34页 |
| ·hIFNβ-HSA 的Western-Blotting 鉴定 | 第34页 |
| ·超声波破碎 | 第34页 |
| ·高效液相色谱法（HPLC）检测 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶活性电泳的测定 | 第35页 |
| ·蛋白酶分子量确定 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·融合蛋白诱导表达过程中降解现象的确定 | 第35-37页 |
| ·HPLC 对融合蛋白降解部位的鉴定 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母蛋白酶的活性酶谱分析 | 第38-40页 |
| ·蛋白酶的确定 | 第40-41页 |
| ·本章主要结论 | 第41-43页 |
| 第四章 结论与展望 | 第43-45页 |
| ·主要结论 | 第43页 |
| ·存在的问题和展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
