| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| ·阿尔茨海默病概况 | 第8页 |
| ·β-淀粉样蛋白的生成 | 第8-9页 |
| ·β-淀粉样蛋白的神经毒性 | 第9-10页 |
| ·β-淀粉样蛋白引发的其他可能作用机制 | 第10-11页 |
| ·β-淀粉样蛋白与氧化应激 | 第10页 |
| ·β-淀粉样蛋白与炎症反应 | 第10-11页 |
| ·β-淀粉样蛋白与细胞凋亡 | 第11页 |
| ·目前针对β-淀粉样蛋白的AD 治疗方案 | 第11-12页 |
| ·本课题开展的意义 | 第12-13页 |
| 第二章 Aβ_(42)基因的克隆及表达载体的构建 | 第13-25页 |
| ·绪言 | 第13-14页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·工具酶及菌株 | 第14页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第14-15页 |
| ·培养基和细胞 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-20页 |
| ·总m RNA 的提取和cDNA 的制备 | 第15-16页 |
| ·RT-PCR | 第16-17页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-Aβ42 的构建 | 第17-19页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第19页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1-Aβ_(42)-BL21 的制备 | 第19-20页 |
| ·结果 | 第20-23页 |
| ·总m RNA 的提取和cDNA 的制备 | 第20页 |
| ·编码Aβ基因的克隆 | 第20页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-Aβ_(42) 的构建 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第21-23页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1-Aβ_(42)-BL21 的构建 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-25页 |
| 第三章 GST-Aβ_(42)融合蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第25-34页 |
| ·绪言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·药品与试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的诱导条件的优化 | 第27页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的分离纯化 | 第27页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的SDS-PAGE 鉴定 | 第27页 |
| ·GST 酶活测定 | 第27页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的Western-bloting 鉴定 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的诱导条件优化 | 第28-29页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的SDS-PAGE 鉴定 | 第30-31页 |
| ·GST 酶活测定 | 第31页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的Western bloting 鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第四章 GST-Aβ_(42)融合蛋白的酶切及Aβ_(42)活性初步测定 | 第34-47页 |
| ·绪言 | 第34页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·材料和试剂 | 第34-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·GST-Aβ_(42) 融合蛋白的酶切 | 第36页 |
| ·切割后目的蛋白的SDS-PAGE 鉴定 | 第36-37页 |
| ·切割后目的蛋白的Tricine-SDS-PAGE 鉴定 | 第37页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第37页 |
| ·Aβ_(42) 单体的银染鉴定 | 第37页 |
| ·Aβ_(42) 的HPLC 含量测定 | 第37页 |
| ·Aβ_(42) 的得率测定 | 第37-38页 |
| ·Aβ_(42) 片段对SH-SY5Y 细胞增殖的影响 | 第38页 |
| ·Hoechst 33342-PI 双染法测定Aβ_(42) 诱导的细胞凋亡 | 第38页 |
| ·Aβ_(42) 聚集的硫磺素T 荧光分析 | 第38页 |
| ·结果 | 第38-45页 |
| ·Aβ_(42) 的SDS-PAGE 鉴定 | 第38-39页 |
| ·离柱酶切条件的优化 | 第39-40页 |
| ·Aβ_(42) 的Tricine-SDS-PAGE 鉴定 | 第40页 |
| ·Aβ_(42) 的Western blot 鉴定 | 第40页 |
| ·Aβ_(42) 的的银染鉴定 | 第40-41页 |
| ·Aβ_(42) 的HPLC 含量测定 | 第41-42页 |
| ·Aβ_(42) 的得率测定 | 第42页 |
| ·Aβ_(42) 对SH-SY5Y 细胞增殖的作用 | 第42-43页 |
| ·Hoechst 33342-PI 双染分析 | 第43-44页 |
| ·Thioflavin-T 荧光分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第五章 论文总结与展望 | 第47-48页 |
| ·论文总结 | 第47页 |
| ·问题与展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
