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一个新的稻瘟菌致病相关基因MgLDB1的鉴定与功能分析

致谢第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-17页
第一章 文献综述第17-47页
   ·LIM域结合蛋白(LDB)研究进展第17-29页
     ·LIM结合蛋白(LDB)的发现第17页
     ·LIM结合蛋白(LDB)的分类第17-18页
     ·LDB基因不同剪接方式及其蛋白结构特点第18-21页
       ·LDB基因不同剪接第18-19页
       ·LDB蛋白结构特点第19-21页
     ·LIM域结合蛋白LDB的功能第21-22页
     ·LIM域结合蛋白的剂量对生物学功能的影响第22-23页
     ·LDB互作蛋白—LIM结构域蛋白的研究第23-27页
       ·LIM结构域蛋白发现与结构第23-24页
       ·LIM结构域蛋白分类第24-25页
       ·LIM结构域蛋白功能第25-27页
         ·LIM-HD功能第25-26页
         ·核定位单纯LIM蛋白(LMO)第26页
         ·穿梭于细胞质和细胞核的LIM结构域蛋白第26-27页
     ·LDB蛋白的降解第27-28页
     ·LDB蛋白与LIM蛋白互作的分子机制第28-29页
   ·稻瘟病与稻瘟病菌第29-35页
     ·稻瘟病菌的生活史第30-31页
     ·稻瘟病菌附着胞形成第31页
     ·参与稻瘟病菌附着胞形成的相关基因第31-35页
       ·分生孢子形成相关基因第32页
       ·参与表面识别相关基因基因第32-33页
       ·跨膜蛋白相关基因第33-34页
       ·甘油合成相关基因第34页
       ·黑色素合成相关基因第34-35页
   ·MAPKinase及其它稻瘟菌信号转导途径第35-44页
     ·MAPKinase信号转导途径第35-41页
       ·MAPKinase在哺乳动物上的研究第36-37页
       ·MAPKinase在植物上的研究第37页
       ·MAPKinase在真菌上的研究第37-38页
       ·MAPKinase在稻瘟菌上的研究第38-41页
     ·其它稻瘟菌信号转导途径的研究第41-44页
       ·cAMP途径第41-42页
       ·G蛋白途径第42-43页
       ·Ca~(2+)离子途径第43-44页
   ·研究方案及技术路线第44-45页
   ·本研究的目的与意义第45-47页
第二章 稻瘟病菌致病相关基因MgLDB1鉴定与功能分析第47-110页
   ·材料与方法第47-65页
     ·试验菌株第47页
     ·实验所用培养基第47-51页
       ·细菌培养基:第47页
       ·AIM培养基第47-48页
       ·CM培养基及其它培养基第48-50页
       ·BDCM培养基第50页
       ·大麦粒培养基第50页
       ·燕麦片培养基第50页
       ·MM培养基第50-51页
     ·分子生物学实验第51-58页
       ·PCR反应第51-53页
       ·DNA酶切第53页
       ·酶切片段的去磷酸化(SAP)第53-54页
       ·DNA片段的凝胶回收第54页
       ·连接反应第54页
       ·CTAB法提取基因组DNA第54-55页
       ·Southern杂交分析(DIG)第55-58页
         ·DIG-DNA标记第55页
         ·稻瘟病菌基因组DNA的消化、电泳及变性第55-56页
         ·DNA转膜第56-57页
         ·Southern杂交过程第57页
         ·免疫显色第57-58页
     ·感受态的制备与转化第58-60页
       ·E.coliDH5α感受态制备与转化第58-59页
         ·热激感受态细胞的制备(CaCl_2法)第58页
         ·大肠杆菌转化第58-59页
       ·农杆菌感受态的制备与转化第59页
         ·农杆菌电激感受态制备第59页
         ·农杆菌电激转化第59页
       ·农杆菌介导的稻瘟菌转化第59-60页
     ·稻瘟菌原生质体的制备与转化第60-61页
       ·稻瘟菌原生质体制备第60页
       ·稻瘟菌原生质体转化第60-61页
     ·稻瘟病菌性状研究第61-65页
       ·菌落生长速度及菌落特性第61页
       ·稻瘟病菌产孢培养和产孢量第61-62页
       ·附着孢形成实验第62页
       ·稻瘟菌有性生殖实验第62页
       ·稻瘟菌单孢分离实验第62-63页
       ·大麦和水稻离体接种第63页
       ·洋葱表皮穿透实验第63页
       ·细胞壁降解酶对细胞完整性的影响第63页
       ·NaC1对菌落生长的影响第63-64页
       ·SDS对细胞完整性的影响第64页
       ·刚果红对细胞完整性的影响第64页
       ·Calcoflour white对细胞完整性的影响第64页
       ·稻瘟病菌细胞核的DAPI染色与观察第64-65页
         ·稻瘟菌分生孢子细胞核的DAPI染色与观察第65页
         ·稻瘟菌菌丝体细胞核的DAPI染色与观察第65页
       ·稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着孢的GFP观察第65页
   ·试验结果与分析第65-103页
     ·A2-12-3突变体的获得第65-69页
       ·稻瘟菌的转化第65-67页
       ·转化子致病性的初步筛选及突变体A2-12-3的获得第67-68页
       ·致病缺陷突变体A2-12-3遗传稳定性测定第68-69页
     ·突变体A2-12-3突变基因鉴定及序列分析第69-80页
       ·巢式反向PCR方法改进及引物设计第69-71页
       ·突变体A2-12-3的T-DNA侧翼DNA序列获得第71-72页
       ·突变体A2-12-3T-DNA标记基因的鉴定与分析第72-80页
         ·A2-12-3突变体T-DNA插入基因的鉴定第72-75页
         ·突变体A2-12-3突变基因MGG_01057.5分析第75-80页
     ·MgLDB1基因的时空表达第80-84页
       ·MgLDB1-GFP融合表达第80页
       ·LDB1基因的表达定位第80-81页
       ·MgLDB1基因在附着孢形成过程中的表达第81-84页
     ·MgLDB1基因缺失突变第84-87页
       ·MgLDB1基因缺失载体的构建第84-86页
       ·敲除突变体的获得及其验证第86-87页
     ·MgLDB1基因突变体的恢复突变第87-89页
       ·互补载体构建第87-88页
       ·互补转化子的获得第88-89页
     ·生物学性状研究第89-101页
       ·△AMgLDB1(AK58)突变体菌落形态和生长速度第89-91页
       ·△MgLDB1(AK58)突变体不能形成分生孢子第91页
       ·缺失突变体△MgLDB1(AK58)有性生殖丧失第91页
       ·△MgLDB1突变体致病性研究第91-96页
         ·△MgLDB1突变体对大麦致病性测定第91-92页
         ·AMgLDB1突变体对水稻致病性测定第92-96页
       ·MgLDB1基因突变对细胞完整性影响第96-101页
         ·MgLDB1基因细胞完整性影响(一)—SDS处理第96-97页
         ·基因突变对细胞完整性影响(二)—刚果红处理第97-99页
         ·基因突变对细胞完整性影响(三)——calcofluor white处理第99-101页
         ·基因突变对细胞完整性影响(四)——Glucanex处理第101页
     ·MgLDB1基因突变后对渗透压敏感性影响第101-103页
   ·讨论第103-110页
     ·扩增T-DNA侧翼基因组DNA序列(鉴定标记基因)方法的改进第103页
     ·MgLDB1基因的信息生物学分析第103-105页
     ·LDB基因功能研究第105-106页
     ·MgLDB1基因生殖作用的影响第106页
     ·MgLDB1基因是细胞完整性负调控因子第106-107页
     ·研究MgLDB1突变体细胞对渗透压敏感性变化第107-108页
     ·未来研究第108-110页
第三章 突变体A1-17-9的研究第110-123页
   ·材料与方法第110页
   ·结果与分析第110-121页
     ·基因克隆及其序列分析第110-115页
       ·反向巢式PCR扩增A1-17-9突变体T-DNA的左侧翼序列第110页
       ·A1-17-9突变体T-DNA插入基因鉴定第110-112页
       ·A1-17-9突变体T-DNA标记基因信息生物学分析第112-115页
     ·A1-17-9突变体生物学特性研究第115-121页
       ·A1-17-9突变体的菌落形态和生长速度第115-116页
       ·A1-17-9突变体的大麦和水稻致病性测定第116-117页
       ·A1-17-9突变体的附着孢形成实验第117页
       ·A1-17-9突变体的洋葱表皮穿透实验第117-118页
       ·有性生殖实验第118-119页
       ·突变体A1-17-9单孢分离、潮霉素抗性与致病性实验第119-121页
         ·A1-17-9突变体子囊孢子的单孢分离第119-120页
         ·单孢分离后潮霉素抗性实验第120页
         ·单孢菌落的致病性实验第120-121页
   ·本章小结第121-123页
参考文献第123-133页

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