| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 1 绪论 | 第14-50页 |
| ·肿瘤的基因治疗 | 第14-28页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·肿瘤基因治疗常用策略 | 第14-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| ·VP3 | 第28-37页 |
| ·概述 | 第28-29页 |
| ·VP3与鸡贫血病毒 | 第29-31页 |
| ·VP3诱导的肿瘤细胞凋亡 | 第31-37页 |
| ·蛋白转导域研究进展 | 第37-49页 |
| ·蛋白转导域与HIV-TAT蛋白转导结构域 | 第37-40页 |
| ·蛋白转导域的作用机制 | 第40-44页 |
| ·TAT-PTD转导的优越性 | 第44页 |
| ·PTD融合分子的制备 | 第44-45页 |
| ·PTD在医学中的应用 | 第45-48页 |
| ·问题与展望 | 第48-49页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第49-50页 |
| 2 实验材料 | 第50-56页 |
| ·质粒和菌种 | 第50页 |
| ·细胞系 | 第50-51页 |
| ·实验动物 | 第51-52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要溶液配制和使用仪器 | 第53-56页 |
| 3 SP-TAT-VP3融合基因真核表达载体的构建 | 第56-67页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·SP-TAT-VP3融合基因PCR引物的设计与合成 | 第56-57页 |
| ·SP-TAT-VP3融合基因与plenti6-V5-D-TOPO(?)表达载体的连接及筛选鉴定 | 第57-59页 |
| ·实验结果 | 第59-65页 |
| ·SP-TAT-VP3融合基因PCR引物的设计与合成 | 第59-62页 |
| ·SP-TAT-VP3融合基因的合成和真核表达载体的构建 | 第62-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 4 SP-TAT-VP3融合基因的表达对HepG2细胞生物学特性的影响 | 第67-85页 |
| ·实验方法 | 第67-71页 |
| ·细胞培养 | 第67-68页 |
| ·Blasticidin霉素筛选浓度的确定 | 第68页 |
| ·脂质体介导基因转染 | 第68页 |
| ·单克隆细胞株的筛选 | 第68-69页 |
| ·瞬时转染与共培养 | 第69页 |
| ·RT—PCR检测SP-TAT-VP3融合基因的RNA表达水平 | 第69页 |
| ·Western blot检测SP-TAT-VP3融合基因蛋白表达水平 | 第69-70页 |
| ·免疫荧光细胞化学的间接染色方法检测SP-TAT-VP3融合基因蛋白表达 | 第70页 |
| ·细胞增殖活性的检测 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71-80页 |
| ·SP-TAT-VP3融合基因表达载体转染后HepG2细胞体外增殖能力明显下降 | 第71-75页 |
| ·Blasticidin霉素筛选浓度确定和筛选稳定表达SP-TAT-VP3融合基因的单克隆细胞 | 第75-76页 |
| ·SP-TAT-VP3融合蛋白的分泌表达及TAT-VP3对HepG2细胞的生长抑制作用 | 第76-77页 |
| ·共培养后的HepG2细胞可观察到细胞周期G1期阻滞 | 第77-79页 |
| ·SP-TAT的毒性检测 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-85页 |
| 5 SP-TAT-VP3融合基因的表达对裸鼠移植瘤的抑制作用 | 第85-90页 |
| ·实验方法 | 第85-86页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第85页 |
| ·制备形态学标本 | 第85页 |
| ·免疫组织化学反应 | 第85-86页 |
| ·实验结果 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| 6 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 攻读博士学位期间的成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
