| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·甲烷氧化菌及其分类 | 第12-14页 |
| ·甲烷单加氧酶基因及其蛋白结构 | 第14-16页 |
| ·甲烷氧化菌 MMO 的调控机制 | 第16-18页 |
| ·甲烷氧化菌基因工程研究进展 | 第18-19页 |
| ·甲烷氧化菌工业应用研究进展 | 第19-20页 |
| ·甲烷氧化菌氧化甲烷生产甲醇的研究 | 第19页 |
| ·甲烷氧化菌氧化丙烯生产环氧丙烷的研究 | 第19-20页 |
| ·甲烷氧化菌应用于环境治理的研究 | 第20页 |
| ·本论文研究的目的、意义、内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 接合转导实验最佳细胞密度的优化 | 第22-30页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料和方法 | 第22-28页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·质粒 | 第22-23页 |
| ·E.coli S17-1 的培养方法 | 第23页 |
| ·M. trichosporium OB3b 的培养方法 | 第23-24页 |
| ·E. coli S17-1（pTJS175）和 M. trichosporium OB3b 接合作用原理 | 第24-25页 |
| ·E. coli S17-1（pTJS175）和 M. trichosporium OB3b 接合条件优化的方法 | 第25-26页 |
| ·不同生长状态E. coli S17-1（pTJS175）的控制方法 | 第26页 |
| ·不同生长状态M. trichosporium OB3b 的控制方法 | 第26-27页 |
| ·突变体的验证方法 | 第27页 |
| ·接合实验条件的评价方法 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-29页 |
| ·接合实验中 E. coli S17-1(pTJS175)最佳细胞密度的优化 | 第28-29页 |
| ·接合实验中 M. trichosporium OB3b 最佳细胞密度的优化 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第三章 含有抗生素标记基因突变体的构建 | 第30-42页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料和方法 | 第30-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·菌株的培养方法 | 第30-32页 |
| ·质粒构建与转化的方法 | 第32-33页 |
| ·pSHK 质粒的构建策略 | 第33-35页 |
| ·E. coli S17-1（pSHK/pTJS175)与 M. trichosporium OB3b(甲烷培养)接合的方法 | 第35页 |
| ·E. coli S17-1（pSHK/pTJS175)与 M. trichosporium OB3b(甲醇培养)接合的方法 | 第35-36页 |
| ·自杀载体pSHK 与M. trichosporium OB3b 染色体发生同源交换的原理及其突变体的验证方法 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·pMMO 下游基因和卡那霉素抗性基因的克隆及序列测定 | 第36-38页 |
| ·自杀载体pSHK 的酶切验证，转化及鉴定 | 第38-39页 |
| ·转pSHK 的 M. trichosporium OB3b 突变体的筛选 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第四章 异源蛋白表达系统的构建 | 第42-58页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料和方法 | 第42-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·菌株的培养方法 | 第42-44页 |
| ·质粒构建与转化的方法 | 第44-45页 |
| ·pJSG 质粒的构建策略 | 第45页 |
| ·E. coli S17-1（pJSG）与M. trichosporium OB3b接合的方法 | 第45-46页 |
| ·突变体的验证方法 | 第46页 |
| ·整合型载体pJSG 在 M. trichosporium OB3b 染色体中整合位点的分析方法 | 第46-48页 |
| ·Colorimetric assary 测定sMMO 酶活 | 第48页 |
| ·荧光检测方法 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-58页 |
| ·质粒pJSG 的验证，转化及鉴定 | 第49-50页 |
| ·pJSG 导入 M. trichosporium OB3b 及其突变体的筛选，鉴定 | 第50-53页 |
| ·pJSG 在M. trichosporium OB3b 染色体中整合位点的分析 | 第53页 |
| ·M. trichosporium OB3b 突变体的sMMO 酶活检测 | 第53页 |
| ·M. trichosporium OB3b 突变体的荧光分析 | 第53-54页 |
| ·铜离子对M. trichosporium OB3b 突变体表达GFP 的影响 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 主要实验仪器及试剂 | 第65-67页 |
| 一、实验仪器 | 第65-66页 |
| 二、化学试剂 | 第66页 |
| 三、基因操作酶和试剂盒 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
