| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-25页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·烟草根黑腐病的病原、病症、致病机制及传播途径 | 第10页 |
| ·植物病原菌的检测方法 | 第10-16页 |
| ·传统方法 | 第10-11页 |
| ·生物技术在植物病原菌检测方面的应用 | 第11-14页 |
| ·PCR 技术 | 第14-16页 |
| ·提取和纯化土壤及沉积物微生物总DNA 的研究进展 | 第16-20页 |
| ·土壤病原真菌的定量方法 | 第20-23页 |
| ·选择性培养基培养计数 | 第20页 |
| ·PCR 技术 | 第20-23页 |
| ·研究目的与内容 | 第23-24页 |
| ·研究目的 | 第23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24页 |
| ·本研究的创新点 | 第24-25页 |
| 2 烟草根黑腐病病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第25-33页 |
| ·材料与仪器 | 第25-27页 |
| ·供试菌株 | 第25页 |
| ·主要培养基 | 第25页 |
| ·细菌及真菌基因组DNA 提取试剂 | 第25-26页 |
| ·其他主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·细菌基因组DNA 的制备 | 第27-28页 |
| ·真菌基因组DNA 的制备 | 第28页 |
| ·烟草根黑腐病病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第28-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·引物的筛选 | 第30-31页 |
| ·常规PCR 检测体系的建立和优化 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 3 土壤中烟草根黑腐病病菌常规PCR 检测体系的建立 | 第33-39页 |
| ·材料与仪器 | 第33页 |
| ·供试土壤样品 | 第33页 |
| ·土壤基因组DNA 提取试剂 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·烟草根黑腐病菌分生孢子悬液的制备 | 第33页 |
| ·土壤接种 | 第33页 |
| ·土壤基因组总DNA 的制备 | 第33-34页 |
| ·土壤中烟草根黑腐病病菌常规PCR 体系的优化建立 | 第34页 |
| ·PCR 扩增产物克隆、转化和鉴定 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-37页 |
| ·土壤基因组总DNA 制备 | 第35-36页 |
| ·土壤中烟草根黑腐病病菌常规PCR 体系的优化建立 | 第36页 |
| ·PCR 产物扩增条带正确性的验证 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 4 土壤中烟草根黑腐病病菌SYBR GREENⅠ实时定量PCR 检测体系的建立 | 第39-46页 |
| ·材料与仪器 | 第39页 |
| ·供试菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·土壤总DNA 的制备 | 第39页 |
| ·SYBR GreenⅠPCR 检测体系的建立和优化 | 第39页 |
| ·SYBR GreenⅠ实时定量PCR 特异性检测 | 第39-40页 |
| ·SYBR GreenⅠPCR 灵敏度检测及标准曲线的绘制 | 第40页 |
| ·接种土壤的SYBR GreenⅠ实时定量PCR 的检测 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·SYBR GreenⅠPCR 检测体系的建立和优化 | 第40页 |
| ·SYBR GreenⅠPCR 特异性检测 | 第40-41页 |
| ·SYBR GreenⅠPCR 灵敏度检测及标准曲线的绘制 | 第41-43页 |
| ·接种土壤的SYBR GreenⅠ实时定量PCR 检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 5 土壤中烟草根黑腐病病菌TAQMAN 实时定量PCR 检测体系的建立 | 第46-52页 |
| ·材料与仪器 | 第46页 |
| ·供试菌株 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·土壤总DNA 的制备 | 第46页 |
| ·TaqMan 探针检测体系的建立 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·TaqMan 探针实时定量PCR 最优检测体系的建立和优化 | 第47-48页 |
| ·TaqMan 探针实时定量PCR 特异性检测 | 第48页 |
| ·TaqMan 探针实时定量PCR 灵敏度检测及标准曲线的绘制 | 第48-49页 |
| ·接种土壤的TaqMan 探针实时定量PCR 检测 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 6 主要结论与后续工作展望 | 第52-54页 |
| ·主要结论 | 第52页 |
| ·后续工作展望 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63页 |
| A 硕士学位期间发表的论文及专利目录 | 第63页 |
| B 攻读硕士学位期间参与的科研项目 | 第63页 |
