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sytI分子特性分析与miRNA对丝蛋白调控

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-11页
第一章 文献综述第11-32页
   ·RNA编辑研究进展第11-22页
     ·参与编辑的常见酶类及种类第11-12页
     ·常见的编辑类型第12-14页
       ·A到I的RNA编辑第12-13页
       ·C到U的RNA编辑第13-14页
     ·影响编辑的因素第14-18页
       ·编辑位点5'-序列的影响第14页
       ·编辑位点3'-序列的影响第14页
       ·编辑位置5'端邻近核苷的影响第14-15页
       ·距离的影响第15页
       ·引导RNA(gRNA)的影响第15页
       ·密码子偏爱性的影响第15-16页
       ·ATP的影响第16页
       ·编辑位点间非独立性(共编辑)的影响第16页
       ·编辑位点互补序列(ECS)的影响第16-17页
       ·进化保守性及选择性压力的影响第17页
       ·基因组重复序列的影响第17-18页
     ·鉴定RNA编辑的方法第18-19页
       ·随机鉴定法第18页
       ·序列保守性比较法第18页
       ·基因组序列与cDNA序列对比法第18-19页
       ·免疫亲和纯化法第19页
     ·RNA编辑与疾病第19-20页
     ·RNA编辑与microRNA/RNAi的关系第20-21页
     ·RNA编辑的进化意义第21-22页
   ·miRNA研究进展第22-32页
     ·发现历史第22-23页
     ·miRNA的生物合成第23-24页
     ·miRNA基因组结构与表达调控第24页
     ·常见的miRNA数据资源第24-25页
     ·miRNA预测方法第25-26页
     ·常见的候选miRNA实验鉴定方法第26-27页
       ·Northern杂交第26页
       ·克隆与RT-PCR方法第26-27页
       ·原位杂交第27页
       ·芯片技术第27页
     ·miRNA与动、植物发育第27-29页
     ·miRNA与疾病第29-30页
     ·miRNA与生物进化第30页
     ·miRNA的另一面——启动性第30-32页
第二章 syt I分子特性对RNA编辑的调控第32-51页
   ·引言第32-33页
   ·材料与方法第33-39页
     ·所用数据库及计算软件第33页
     ·基因组DNA提取第33-34页
     ·总RNA提取第34页
     ·反转录第一条cDNA链合成第34-35页
     ·RT-PCR扩增第35-36页
     ·PCR产物胶回收第36页
     ·PCR扩增产物的T载体连接反应第36-37页
     ·E.coli TG1感受态细胞的制备第37页
     ·连接产物转化感受态细胞第37页
     ·质粒DNA提取第37-38页
     ·利用Lipofectamine 2000(invitrogen)转染家蚕BmN细胞第38-39页
   ·结果与讨论第39-51页
     ·昆虫syt I转录本中编辑外显子和非编辑外显子具有不同的GC、GC3含量及平均ΔG第39-41页
     ·编辑外显子具有较低的GC3和GC含量及较高的ΔG在果蝇基因组中是一种普遍的趋势第41页
     ·进化过程中具有较低GC3、GC含量和较高ΔG的编辑外显子并没有呈现其应有的高取代率第41-42页
     ·编辑外显子中较高的纯化选择抑制了核苷改变第42-44页
     ·纯化选择、RNA编辑及DNA分子特性三者之间的关系第44-45页
     ·果蝇syt I编辑外显子突变载体构建分析第45-46页
     ·利用家蚕BmN细胞共转染方法鉴定果蝇syt I外显子GC含量对其编辑效率的影响第46-47页
     ·果蝇syt I编辑外显子GC含量可影响其上编辑位点的编辑效率第47-49页
     ·GC含量是否同样会影响其它昆虫物种特异性syt I转录本的编辑效率?第49-51页
第三章 syt I保守结构域C2组织结构分析第51-63页
   ·引言第51页
   ·材料与方法第51-52页
   ·实验结果第52-60页
     ·拟南芥、线虫、果蝇和人类C2结构域基因的鉴定第52-53页
     ·拟南芥、线虫、果蝇和人类C2结构域的特点第53-54页
     ·C2结构域拼接一致序列的保守性与进化第54-56页
     ·C2结构域基因结构及其功能进化保守性第56-57页
     ·C2结构域的系统发生学分析第57-59页
     ·C2结构域不同类型的内含子丢失现象第59-60页
   ·讨论第60-63页
     ·内含子相分布与进化第61页
     ·拼接序列一致性与进化第61-62页
     ·C2结构域组织结构的进化保守性第62-63页
第四章 家蚕miRNA及其靶点鉴定第63-77页
   ·引言第63-64页
   ·材料与方法第64-66页
     ·数据库及miRNA预测第64页
     ·RNA提取、多聚腺苷化及cDNA合成第64-65页
     ·miRNA表达分析第65页
     ·miRNA靶点预测第65-66页
     ·miRNA-mRNA二级结构标准和靶基因的GO分析第66页
   ·结果与讨论第66-76页
     ·家蚕miRNA鉴定及特性第66-71页
     ·家蚕miRNA的表达分析第71-72页
     ·家蚕miRNA靶点鉴定第72-76页
   ·结论第76-77页
第五章 异源体系鉴定miRNA对蚕丝蛋白的调控第77-85页
   ·引言第77-78页
   ·材料与方法第78-81页
     ·植物材料与生长环境第78页
     ·RNA提取与RT-PCR第78-79页
     ·miRNA/靶点杂交及其二级结构预测第79页
     ·载体构建第79-80页
     ·农杆菌培养与叶片渗透第80页
     ·GUS组织化学染色与酶活分析第80-81页
   ·结果与讨论第81-85页
     ·家蚕丝蛋白3'UTR序列克隆与表达载体构建第81-82页
     ·内源miRNA抑制靶基因的表达第82-83页
     ·miRNA与靶位点的序列互补是其调控基因表达的首要条件第83-84页
     ·叶片瞬时表达可以作为一种鉴定miRNA靶点调控的高效方法第84-85页
参考文献第85-99页
附件-A第99-101页
附件-B第101-102页
附件-C第102-107页
附件-D第107-108页
附件-E第108-113页
附件-F第113-117页
附件-G第117-120页
博士阶段发表论文列表第120-121页
致谢第121页

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