| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩略语表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-45页 |
| 1 Rab蛋白概述 | 第19-26页 |
| ·Rab的分类及进化 | 第20-23页 |
| ·Rab的GTP/GDP循环 | 第23页 |
| ·Rab的细胞定位及功能 | 第23-26页 |
| 2 Rab11研究进展 | 第26-34页 |
| ·Rab11的发现与结构特点 | 第26-29页 |
| ·Rab11的效应因子 | 第29-30页 |
| ·Rab11的细胞定位与功能 | 第30-34页 |
| 3 游仆虫的特点及本课题的意义 | 第34-38页 |
| ·八肋游仆虫的生物学特征 | 第34-36页 |
| ·游仆虫的研究优势 | 第36-37页 |
| ·本课题的研究基础和意义 | 第37-38页 |
| 4 参考文献 | 第38-45页 |
| 第二章 EoRab11a的克隆及序列分析 | 第45-65页 |
| 1 材料 | 第45-48页 |
| ·菌株及质粒 | 第45页 |
| ·试剂及工具酶 | 第45-46页 |
| ·主要试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-53页 |
| ·细胞培养 | 第48页 |
| ·八肋游仆虫大核DNA的制备 | 第48页 |
| ·游仆虫总RNA的提取及cDNA的合成 | 第48-49页 |
| ·EoRab11基因的扩增 | 第49-53页 |
| ·EoRab11a基因的序列分析 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-59页 |
| ·EoRab11a基因的克隆 | 第53-55页 |
| ·EoRab11a基因的序列分析 | 第55-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 5 参考文献 | 第62-65页 |
| 第三章 EoRab11a蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第65-81页 |
| 1 材料 | 第65-68页 |
| ·菌株及质粒 | 第65页 |
| ·试剂及工具酶 | 第65-66页 |
| ·主要试剂的配制 | 第66-67页 |
| ·实验仪器 | 第67-68页 |
| 2 方法 | 第68-74页 |
| ·重组质粒pRSET-C-EoRab11a的构建及鉴定 | 第68-71页 |
| ·EoRab11a的表达 | 第71页 |
| ·EoRab11a的纯化 | 第71-73页 |
| ·Western blotting印迹 | 第73-74页 |
| 3 结果 | 第74-78页 |
| ·重组质粒pRSET-C-EoRab11a的鉴定 | 第74-75页 |
| ·融合蛋白His_6-EoRab11a的表达 | 第75-76页 |
| ·融合蛋白His_6-EoRab11a的纯化 | 第76-77页 |
| ·融合蛋白His_6-EoRab11a的Western blotting鉴定 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 5 参考文献 | 第79-81页 |
| 第四章 EoRab11a及其突变体的GTP酶活性测定 | 第81-95页 |
| 1 材料 | 第81-83页 |
| ·菌株及质粒 | 第81页 |
| ·突变用引物 | 第81页 |
| ·试剂及工具酶 | 第81-82页 |
| ·主要试剂的配制 | 第82-83页 |
| ·实验仪器 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-86页 |
| ·EoRab11a磷酸结合环处的突变 | 第83-85页 |
| ·EoRab11a各突变体的表达及纯化 | 第85页 |
| ·EoRab11a及其突变体的GTPase活性分析 | 第85-86页 |
| 3 结果 | 第86-90页 |
| ·EoRab11a磷酸结合环(P-loop)中两个位点的突变 | 第86-88页 |
| ·EoRab11a各突变体的表达、纯化 | 第88页 |
| ·EoRab11a及其突变体的GTPase活性分析 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-92页 |
| 5 参考文献 | 第92-95页 |
| 第五章 EoRab11a的抗体制备及免疫荧光定位 | 第95-107页 |
| 1 材料 | 第95-97页 |
| ·实验动物及小型器具 | 第95页 |
| ·主要生化试剂 | 第95-96页 |
| ·主要试剂的配制 | 第96-97页 |
| ·实验仪器 | 第97页 |
| 2 方法 | 第97-100页 |
| ·抗原的制备 | 第97页 |
| ·小鼠免疫 | 第97-98页 |
| ·ELISA检测抗体效价 | 第98页 |
| ·八肋游仆虫总蛋白提取 | 第98页 |
| ·八肋游仆虫蛋白提取物的免疫印迹 | 第98-99页 |
| ·免疫荧光定位 | 第99-100页 |
| 3 结果 | 第100-102页 |
| ·抗体的滴度测定 | 第100-101页 |
| ·抗体的特异性检测 | 第101页 |
| ·EoRab11a参与游仆虫的吞噬作用 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| 5 参考文献 | 第104-107页 |
| 第六章 EoRab11a在HEK293T细胞中的定位 | 第107-123页 |
| 1 材料 | 第107-109页 |
| ·细胞、菌株及质粒 | 第107页 |
| ·试剂 | 第107-108页 |
| ·引物 | 第108页 |
| ·主要试剂的配制 | 第108页 |
| ·实验器材 | 第108-109页 |
| 2 方法 | 第109-114页 |
| ·重组质粒pEGFP-C2-EoRab11a的构建 | 第109-111页 |
| ·HEK293T细胞培养 | 第111-113页 |
| ·转染前的准备及细胞转染 | 第113页 |
| ·定位观察 | 第113-114页 |
| 3 结果 | 第114-117页 |
| ·重组质粒pEGFP-C2-EoRab11a的鉴定 | 第114页 |
| ·GFP-EoRab11a定位在间期HEK293T细胞的核周围 | 第114-116页 |
| ·GFP-EoRab11a参与HEK293T细胞的胞质分裂过程 | 第116-117页 |
| 4 讨论 | 第117-118页 |
| 5 参考文献 | 第118-123页 |
| 总结 | 第123-124页 |
| 本课题的展望 | 第124-125页 |
| 附录 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
