| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略语表 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-36页 |
| ·古菌简介 | 第14-16页 |
| ·硫化叶菌简介 | 第16页 |
| ·古菌启动子结构 | 第16-18页 |
| ·古菌RNA聚合酶 | 第18-21页 |
| ·古菌通用转录因子 | 第21-24页 |
| ·TATA-box binding protein | 第21-22页 |
| ·转录因子B(TFB) | 第22-24页 |
| ·转录因子E(TFE) | 第24页 |
| ·古菌转录调控 | 第24-28页 |
| ·古菌遗传操作体系 | 第28-32页 |
| ·报告基因系统 | 第32-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·培养基配方及培养条件 | 第36-39页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-50页 |
| ·硫化叶菌电转化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌DH5α热击转化法 | 第40页 |
| ·构建载有ParaS缺失突变-lacS基因融合片段的报告质粒 | 第40-42页 |
| ·在最短启动子序列中突变并克隆Sso3071启动子 | 第42-43页 |
| ·构建杂合启动子 | 第43页 |
| ·电泳迁移率变动实验(EMSAs) | 第43-44页 |
| ·磁性DNA亲和层析纯化调控蛋白 | 第44页 |
| ·表达重组蛋白 | 第44-45页 |
| ·构建硫化叶菌体内表达载体并表达Mre11、RFC大亚基和PolB1 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot | 第45-46页 |
| ·提取硫化叶菌总RNA | 第46-47页 |
| ·反转录实验 | 第47页 |
| ·制备大肠杆菌DH5α感受态细胞和硫化叶菌E234感受态细胞 | 第47-48页 |
| ·B-galactosidase (LacS)酶活分析 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-84页 |
| ·硫化叶菌阿拉伯糖操纵子结构 | 第50-54页 |
| ·硫磺矿硫化叶菌中的araS启动子在冰岛硫化叶菌中控制D-阿拉伯糖诱导型表达 | 第54-60页 |
| ·定义最短的具有野生型活性的araS启动子片段 | 第60-63页 |
| ·在ara-box,BRE和TATA-box上突变鉴定到重要的碱基位点 | 第63-66页 |
| ·鉴定到一个新的启动子元件 | 第66-68页 |
| ·Initiation Element影响lacS表达 | 第68-70页 |
| ·发现古菌中一个新的转录激活机理 | 第70-73页 |
| ·硫化叶菌粗提液成分特异性地结合在含有ara-box序列的DNA探针上 | 第73-76页 |
| ·DNA亲和层析纯化得到两个可能的调控蛋白 | 第76-79页 |
| ·硫化叶菌表达载体及其应用 | 第79-84页 |
| 4 讨论 | 第84-90页 |
| ·启动子元件及转录调控机理 | 第84-88页 |
| ·转录调控蛋白 | 第88-89页 |
| ·硫化叶菌表达体系 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附录 | 第101-104页 |
| 本研究所用引物 | 第101-104页 |
| 博士期间学术成果 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
