| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1. 前言 | 第9-15页 |
| ·枯草芽孢杆菌研究概况 | 第9-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌简介 | 第9页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展 | 第9-10页 |
| ·枯草芽孢杆菌的蛋白质分泌机制 | 第10-11页 |
| ·信号肽研究进展 | 第11-13页 |
| ·信号肽概述 | 第11页 |
| ·枯草芽孢杆菌的信号肽 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶的研究和应用 | 第13页 |
| ·脂肪酶简介 | 第13页 |
| ·微生物脂肪酶的研究报道 | 第13页 |
| ·课题研究意义和内容 | 第13-15页 |
| ·本课题研究意义 | 第13-14页 |
| ·主要研究内容 | 第14-15页 |
| 2. 材料与方法 | 第15-21页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·工具酶与试剂 | 第15页 |
| ·培养基与培养条件 | 第15-16页 |
| ·PCR 引物 | 第16页 |
| ·实验仪器与设备 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌染色体DNA 的提取 | 第17页 |
| ·质粒DNA 的操作 | 第17-18页 |
| ·质粒DNA 的抽提 | 第17页 |
| ·质粒DNA 的酶切 | 第17页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和胶回收 | 第17页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第17-18页 |
| ·引物合成、PCR 反应和DNA 片段的测序 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第18页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第18-19页 |
| ·重组菌株的发酵表达 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳 | 第19页 |
| ·脂肪酶活力的定性检测 | 第19页 |
| ·脂肪酶活力的定量检测 | 第19-20页 |
| ·重组质粒稳定性的测定 | 第20-21页 |
| 3. 结果与讨论 | 第21-34页 |
| ·枯草芽孢杆菌lipA 基因的克隆及其分泌表达载体的构建 | 第21-26页 |
| ·带自身信号肽lipA 基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·lipA 基因的定点突变 | 第23-24页 |
| ·pMA5 质粒的改造 | 第24-25页 |
| ·重组分泌表达质粒pMA5△MCS-lipA 的构建 | 第25-26页 |
| ·枯草芽孢杆菌4 种信号肽的PCR 扩增和表达质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·重组质粒的枯草芽孢杆菌转化和筛选 | 第28页 |
| ·重组菌株脂肪酶分泌表达活性的定性检测 | 第28-29页 |
| ·重组菌株的发酵表达 | 第29-31页 |
| ·重组菌株的生长曲线测定 | 第29页 |
| ·重组菌株的脂肪酶活力曲线测定 | 第29-31页 |
| ·枯草芽孢杆菌重组菌株分泌表达lipA 的SDS-PAGE 检测 | 第31-32页 |
| ·重组质粒稳定性的研究 | 第32-34页 |
| 4. 主要结论 | 第34-35页 |
| 存在问题与展望 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-43页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43页 |
