| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-31页 |
| ·供试玉米大斑病菌菌株和质粒载体 | 第15页 |
| ·供试培养基的配制 | 第15页 |
| ·供试药品及主要试剂的配制 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·STK1K 基因的克隆 | 第16-20页 |
| ·玉米大斑病菌基因组DNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·MAPKK 同源基因片段STK1K 的扩增 | 第17页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆测序 | 第18-19页 |
| ·利用Genome Walking 获得STK1K 基因侧翼序列 | 第19-20页 |
| ·STK1K 基因片段的PCR 验证 | 第20页 |
| ·STK1K 基因的生物信息学分析 | 第20页 |
| ·玉米大斑病菌 STK1K 基因 RNAi 载体的构建 | 第20-23页 |
| ·引物的设计 | 第20-21页 |
| ·载体构建策略 | 第21页 |
| ·插入片段的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·碱裂解法提取质粒（小量） | 第22页 |
| ·STK1K 基因RNAi 载体的构建 | 第22-23页 |
| ·玉米大斑病菌STK1K 基因敲除载体的构建 | 第23-27页 |
| ·STK1K 基因敲除片段的PCR 扩增 | 第23-25页 |
| ·STK1K 基因敲除载体第一步重组 | 第25页 |
| ·STK1K 基因敲除载体第二步重组 | 第25-26页 |
| ·STK1K 基因敲除载体第三步重组 | 第26-27页 |
| ·玉米大斑病菌遗传转化及转化子的筛选 | 第27-28页 |
| ·重组基因片段的制备 | 第27页 |
| ·原生质体制备与纯化 | 第27-28页 |
| ·原生质体的转化与再生 | 第28页 |
| ·利用潮霉素B 抗性筛选突变体 | 第28页 |
| ·利用PCR 筛选突变体 | 第28页 |
| ·利用 Southern Blotting 技术筛选突变体 | 第28-30页 |
| ·潮霉素探针引物的设计 | 第28-29页 |
| ·DIG 标记 | 第29页 |
| ·限制性内切酶酶切基因组DNA | 第29页 |
| ·电转移 | 第29页 |
| ·Southern 杂交 | 第29-30页 |
| ·玉米大斑病菌 STK1K 基因 RNAi 突变体的形态特征 | 第30-31页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体生长速度的测定 | 第30页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体菌落形态的观察 | 第30页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体菌丝形态的显微观察 | 第30页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体菌株孢子产量的测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-46页 |
| ·STK1K 基因片段的克隆 | 第31-36页 |
| ·STK1K 基因片段的PCR 扩增结果 | 第31页 |
| ·STK1K 基因片段的测序结果 | 第31-32页 |
| ·STK1K 侧翼序列的Genome walking 扩增 | 第32-33页 |
| ·STK1K 基因片段的PCR 验证 | 第33-34页 |
| ·STK1K 基因片段的测序结果 | 第34-35页 |
| ·玉米大斑病菌STK1K 的同源性及聚类分析 | 第35-36页 |
| ·STK1K 基因 RNAi 载体的构建及转化子的筛选 | 第36-42页 |
| ·STK1K 基因正向片段和反向片段的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·STK1K 基因RNAi 载体的酶切验证 | 第37-38页 |
| ·原生质体的制备 | 第38页 |
| ·原生质体的再生与筛选 | 第38页 |
| ·STK1K 基因RNAi 转化子基因组DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·潮霉素磷酸转移酶基因筛选转化子 | 第39页 |
| ·STK1K 基因RNAi 转化子的Southern Blotting 验证 | 第39-40页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体的形态观察 | 第40-41页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体的菌丝形态显微观察 | 第41页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体的生长速度测定 | 第41-42页 |
| ·STK1K 基因RNAi 突变体产孢量的测定 | 第42页 |
| ·STK1K 基因敲除载体的构建及转化子筛选 | 第42-46页 |
| ·重组载体pBS-HPH 的获得 | 第42页 |
| ·STK1K 基因敲除片段的获得 | 第42-44页 |
| ·pBS-I-HPH-Ⅱ重组载体的双酶切验证 | 第44页 |
| ·同源重组片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·STK1K 基因敲除转化子的PCR 验证 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·RNAi 技术的优点 | 第46-47页 |
| ·STK1K 在菌丝及分生孢子发育中的作用 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录 | 第53-68页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
