| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| ·玉米大斑病菌 | 第10页 |
| ·2A 型蛋白磷酸酶 | 第10-11页 |
| ·基因敲除 | 第11-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-27页 |
| ·试验材料 | 第13-15页 |
| ·菌株和质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·供试培养基及试剂配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·抑制剂实验 | 第15页 |
| ·斑蝥素的配制 | 第15页 |
| ·玉米大斑病菌菌丝生长情况的观察 | 第15页 |
| ·玉米大斑病菌分生孢子萌发率的统计 | 第15页 |
| ·玉米大斑病菌PP2A 基因的克隆 | 第15-19页 |
| ·玉米大斑病菌基因组DNA 及总RNA 的提取 | 第15-16页 |
| ·引物设计 | 第16-17页 |
| ·病菌PP2A 基因DNA 同源片段的获得 | 第17-18页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第18页 |
| ·PCR 扩增产物与pMD-19 载体的连接，转化和克隆测序 | 第18-19页 |
| ·基因侧翼序列的获得 | 第19-21页 |
| ·模板DNA 的制备和引物的设计 | 第19-20页 |
| ·Genome walking PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·PP2A 基因的生物信息学分析 | 第21页 |
| ·PP2A-C 基因的拷贝数分析 | 第21-22页 |
| ·探针制备 | 第21页 |
| ·酶切 | 第21页 |
| ·电转移 | 第21-22页 |
| ·Southern Blotting | 第22页 |
| ·免疫检测 | 第22页 |
| ·PP2A-C 基因同源重组载体的构建 | 第22-24页 |
| ·转化子的PCR 筛选 | 第24-25页 |
| ·玉米大斑病菌PP2A-C 基因敲除突变体的生物学性状分析 | 第25-27页 |
| ·PP2A-C 突变菌株菌落、菌丝形态的观察和菌落生长速度测定 | 第25页 |
| ·PP2A-C 突变菌株产毒力的测定 | 第25-26页 |
| ·PP2A-C 突变菌株致病力测定 | 第26页 |
| ·PP2A-C 突变菌株的组织病理学观察 | 第26页 |
| ·PP2A-C 突变菌株高渗条件下菌丝形态的显微观察 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-49页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌生长发育及致病性的影响 | 第27-30页 |
| ·斑蝥素对玉米大斑病菌菌丝生长的影响 | 第27页 |
| ·Cantharidin 对玉米大斑病菌分生孢子萌发的影响 | 第27-29页 |
| ·斑蝥素对HT-毒素活性的影响 | 第29页 |
| ·斑蝥素对致病性的影响 | 第29-30页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·PP2A-C 基因的获得 | 第30-33页 |
| ·玉米大斑病菌PP2A-C 基因DNA 同源片段的扩增 | 第30-31页 |
| ·PP2A-C 基因全长的获得 | 第31-33页 |
| ·PP2A-B 基因的获得 | 第33-35页 |
| ·玉米大斑病菌PP2A-B 基因DNA 同源片段的扩增 | 第33-34页 |
| ·PP2A-B 基因全长的获得 | 第34-35页 |
| ·PP2A-C 和PP2A-B 基因的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| ·PP2A-C 基因的拷贝数验证 | 第37-38页 |
| ·PP2A-C 的同源重组载体的构建 | 第38-40页 |
| ·玉米大斑病菌遗传转化及转化子的筛选 | 第40-43页 |
| ·重组DNA 片段的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·原生质体的再生 | 第41-42页 |
| ·基因敲除突变体的PCR 验证 | 第42-43页 |
| ·玉米大斑病菌PP2A-C 基因的功能分析 | 第43-49页 |
| ·PP2A-C 基因突变体的性状观察 | 第43页 |
| ·突变菌株的生长速度确定 | 第43-44页 |
| ·PP2A-C 突变体菌株在高渗胁迫下的生长形态 | 第44-46页 |
| ·PP2A-C 突变体菌株在PD 液体培养条件下的生长状态 | 第46-47页 |
| ·PP2A-C 突变菌株的漆酶活性 | 第47页 |
| ·突变菌株粗毒素生物学活性的测定 | 第47-48页 |
| ·PP2A-C 突变菌株的致病力 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·PP2A 特异性抑制剂的研究 | 第49页 |
| ·PP2A 基因功能分析 | 第49-50页 |
| ·PP2A 基因片段全长序列的获得 | 第50-51页 |
| ·基因敲除突变体的研究 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
