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表达苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aal的球孢白僵菌工程菌株的构建及其对斜纹夜蛾幼虫的肠道与体壁侵染力

致谢第1-10页
摘要第10-13页
1 丝孢类杀虫真菌的毒力及其基因工程改造的研究第13-29页
   ·丝孢类杀虫真菌的侵染过程和分子机制第14-20页
     ·分生孢子在寄主体表的附着和萌发第14-15页
     ·附着胞的形成和昆虫体壁的穿透第15-17页
     ·菌丝体在寄主血腔内的繁殖和抗寄主免疫作用第17-18页
     ·孢子进入昆虫肠道后的作用第18-20页
   ·丝孢类杀虫真菌毒力改造的基因工程研究第20-24页
     ·杀虫真菌的遗传转化第20-21页
     ·杀虫真菌毒力的遗传改造第21-22页
     ·菌株毒力生物测定的标准化第22-24页
     ·小结第24页
   ·苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3A的研究第24-28页
     ·Vip3A蛋白的特性第25-26页
     ·Vip3A蛋白的杀虫活性第26页
     ·Vip3A蛋白的杀虫作用机理第26-27页
     ·Vip3A蛋白基因的应用第27-28页
   ·展望第28-29页
2 球孢白僵菌对斜纹夜蛾幼虫的毒力测定及菌株筛选第29-34页
   ·材料第29-30页
     ·供试菌株第30页
     ·供试虫源第30页
   ·方法第30-32页
     ·气生分生孢子粉制备第30-31页
     ·生物测定第31页
     ·数据分析第31-32页
   ·结果与分析第32-33页
     ·斜纹夜蛾二龄幼虫死亡率第32-33页
     ·不同菌株高剂量接种对斜纹夜蛾二龄幼虫的半致死时间LT_(50)第33页
   ·讨论第33-34页
3 杀虫蛋白Vip3Aa1在球孢白僵菌中的转化表达与活性分析第34-46页
   ·材料第35-36页
     ·菌株与质粒第35页
     ·试剂和材料第35-36页
     ·供试虫源第36页
   ·方法第36-41页
     ·转化用双元载体的构建第36-37页
     ·感受态球孢白僵菌芽生孢子的制备第37页
     ·芽生孢子转化第37-38页
     ·转化子的PCR鉴定第38页
     ·转化子的RT-PCR鉴定第38页
     ·转化子的Western杂交鉴定第38-39页
     ·Vip3Aa1蛋白在工程菌株气生分生孢子中的表达定位第39-40页
     ·工程菌株孢子中Vip3Aa1在斜纹夜蛾幼虫中肠液中的检测第40-41页
   ·结果与分析第41-43页
     ·转化用双元载体的构建第41页
     ·转化子的鉴定第41-42页
     ·转化子的Western杂交鉴定第42页
     ·Vip3Aa1蛋白在转化子BbV28中的表达和定位第42-43页
     ·昆虫中肠液中Vip3Aa1的检测和功能第43页
   ·讨论第43-46页
4 高表达Vip3Aa1的球孢白僵菌工程菌株对斜纹夜蛾二龄幼虫不同侵染方式的毒力测定第46-56页
   ·材料与方法第47-48页
     ·不同浓度孢子悬液和供试虫源的准备第47页
     ·生物测定第47-48页
     ·数据分析第48页
   ·结果与分析第48-54页
     ·三种生测中斜纹夜蛾二龄幼虫的死亡率第48-51页
     ·时间-剂量-死亡率模型模拟与毒力指标的估算第51-54页
   ·讨论第54-56页
5 讨论与展望第56-58页
参考文献第58-70页
Summary第70-73页
附录:攻读博士学位期间的主要成果第73页

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