| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 植物转录因子 | 第13页 |
| 1.2 HD-Zip转录因子的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 HD-ZipⅣ转录因子研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 拟南芥中的HD-ZipⅣ基因 | 第14-15页 |
| 1.3.2 番茄中的HD-ZipⅣ基因 | 第15-16页 |
| 1.3.3 其他植物中的HD-ZipⅣ基因 | 第16页 |
| 1.4 植物表皮毛的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.4.1 植物表皮毛的作用 | 第16-17页 |
| 1.4.2 单细胞表皮毛的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.3 多细胞表皮毛的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.3.1 番茄表皮毛的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.3.2 其他植物表皮毛的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4.4 植物畸形表皮毛的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 植物细胞分裂 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-39页 |
| 2.1 植物材料及处理 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 番茄材料的处理 | 第23-24页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2.1 番茄HD-ZipⅣ家族成员的鉴定 | 第24页 |
| 2.2.2 番茄HD-Zip Ⅳ基因染色体分布和复制事件 | 第24-25页 |
| 2.2.3 系统进化树的构建 | 第25页 |
| 2.2.4 番茄HD-ZipⅣ基因结构和保守motif预测 | 第25页 |
| 2.3 表达载体的构建和遗传转化 | 第25-30页 |
| 2.3.1 超量表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 RNAi抑制表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.3.3 P_(Wo):Wo表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.3.4 GFP融合表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.5 启动子载体的构建 | 第27页 |
| 2.3.6 农杆菌转化 | 第27-28页 |
| 2.3.6.1 农杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| 2.3.6.2 电击转化法 | 第27-28页 |
| 2.3.7 遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.3.7.1 番茄遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.3.7.2 烟草遗传转化 | 第29页 |
| 2.3.7.3 马铃薯遗传转化 | 第29页 |
| 2.3.8 转基因植株的阳性检测 | 第29-30页 |
| 2.4 基因定量分析 | 第30页 |
| 2.4.1 半定量RT-PCR | 第30页 |
| 2.4.2 实时定量RT-PCR | 第30页 |
| 2.5 酵母双杂交实验 | 第30-32页 |
| 2.5.1 酵母转化载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.5.2 酵母转化 | 第31页 |
| 2.5.3 载体的自激活活性检测 | 第31页 |
| 2.5.4 载体的毒性检测 | 第31-32页 |
| 2.5.5 Mating | 第32页 |
| 2.5.6 蛋白与蛋白互作关系的鉴定 | 第32页 |
| 2.6 目标蛋白的亚细胞定位分析 | 第32-34页 |
| 2.6.1 质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.6.2 原生质体的制备及转化 | 第33-34页 |
| 2.7 GUS组织化学分析 | 第34页 |
| 2.8 扫描电镜观察 | 第34页 |
| 2.9 抗虫实验 | 第34-35页 |
| 2.10 光合速率的测定 | 第35页 |
| 2.11 RNA-Seq分析 | 第35-36页 |
| 2.11.1 样品准备及文库构建 | 第35-36页 |
| 2.11.2 差异表达基因分析 | 第36页 |
| 2.12 气相色谱质谱联用法 | 第36-39页 |
| 2.12.1 生物碱含量的测定 | 第36-37页 |
| 2.12.1.1 气质联用条件 | 第36页 |
| 2.12.1.2 样品的处理与分析 | 第36-37页 |
| 2.12.2 甾醇类化合物的测定 | 第37-39页 |
| 2.12.2.1 气质联用条件 | 第37页 |
| 2.12.2.2 样品的处理与分析 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-75页 |
| 3.1 番茄中的HD-Zip Ⅳ基因 | 第39页 |
| 3.2 番茄HD-ZipⅣ基因染色体分布分析 | 第39-41页 |
| 3.3 不同物种HD-ZipⅣ基因系统进化树分析 | 第41-43页 |
| 3.4 番茄HD-ZipⅣ成员多重序列比对和基因结构分析 | 第43-44页 |
| 3.5 番茄HD-Zip Ⅳ基因保守motif分析 | 第44-47页 |
| 3.6 番茄HD-ZipⅣ基因在不同组织的表达模式 | 第47页 |
| 3.7 番茄HD-ZipⅣ基因在不同激素处理后的表达分析 | 第47-49页 |
| 3.8 番茄HD-Zip Ⅳ基因在不同逆境处理后的表达分析 | 第49-51页 |
| 3.9 SlHDZIV8基因的功能研究 | 第51-61页 |
| 3.9.1 表型观察及表达量分析 | 第51-54页 |
| 3.9.2 GUS组织化学分析 | 第54-55页 |
| 3.9.3 SlHDZIV8蛋白亚细胞定位分析 | 第55页 |
| 3.9.4 酵母双杂交 | 第55-61页 |
| 3.9.4.1 自激活活性与毒性检测 | 第55-57页 |
| 3.9.4.2 Mating | 第57-58页 |
| 3.9.4.3 SlHDZIV8与另一表皮毛基因H1的关系 | 第58-61页 |
| 3.10 Wo~v基因的功能研究及抗虫性分析 | 第61-75页 |
| 3.10.1 Wo~v突变位点的鉴定 | 第61-62页 |
| 3.10.2 异位表达Wo~v在烟草和土豆中诱导多细胞茸毛形成 | 第62-65页 |
| 3.10.3 Wo~v转基因烟草抗虫性分析 | 第65页 |
| 3.10.4 光合活性分析 | 第65-66页 |
| 3.10.5 转录组分析 | 第66-68页 |
| 3.10.6 差异表达基因的鉴定及聚类分析 | 第68-70页 |
| 3.10.7 Wo~v转基因烟草中已知的茸毛相关基因的表达模式 | 第70-71页 |
| 3.10.8 控制多细胞表皮毛形成的通路分析 | 第71-72页 |
| 3.10.9 Wo~v相关基因的实时荧光定量RT-PCR验证 | 第72-74页 |
| 3.10.10 次生代谢物分析 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-81页 |
| 4.1 不同物种间HD-ZipⅣ家族基因系统进化树分析 | 第75-76页 |
| 4.2 番茄HD-ZipⅣ家族基因在不同组织中的表达分析 | 第76页 |
| 4.3 番茄HD-ZipⅣ家族基因在不同激素、逆境处理后的表达分析 | 第76-77页 |
| 4.4 SlHDZIV8可能基于细胞骨架肌动蛋白调控表皮及表皮毛细胞形态 | 第77页 |
| 4.5 茄科物种的多细胞茸毛可能有着相同的调控网络 | 第77页 |
| 4.6 Wo~v转基因烟草的多细胞茸毛形成过程中细胞增殖的调控通路 | 第77-78页 |
| 4.7 Wo~v转基因烟草和非转基因烟草中与激素相关基因的转录调节 | 第78-79页 |
| 4.8 未来展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 附录 | 第94-121页 |
| 作者简介 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
