| 缩略语表 | 第9-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 文献回顾 | 第19-36页 |
| 第一部分 GSDMD-N在非酒精性脂肪性肝炎中表达上调可作为其诊断的潜在生物标记物 | 第36-49页 |
| 1 材料 | 第37-40页 |
| 1.1 NAFLD/NASH患者和正常对照肝脏组织 | 第37-38页 |
| 1.2 抗体 | 第38页 |
| 1.3 其他主要试剂和材料 | 第38-39页 |
| 1.4 仪器设备 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2.1 NAFLD/NASH患者肝脏组织病理学评分 | 第40-41页 |
| 2.2 NAFLD/NASH患者临床病理参数分析 | 第41页 |
| 2.3 HE染色 | 第41-42页 |
| 2.4 油红O染色 | 第42页 |
| 2.5 天狼星红染色 | 第42页 |
| 2.6 总蛋白提取 | 第42-43页 |
| 2.7 BCA法测定蛋白样品浓度 | 第43页 |
| 2.8 免疫蛋白印记 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-47页 |
| 3.1 NAFLD/NASH患者临床病理特征 | 第44-45页 |
| 3.2 NAFLD/NASH患者组织病理特征 | 第45页 |
| 3.3 GSDMD-N在NASH患者肝脏组织中表达上调,与NAS评分呈正相关 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第二部分 GSDMD促进MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生、发展 | 第49-62页 |
| 1 材料 | 第50-53页 |
| 1.1 MCD饮食 | 第50页 |
| 1.2 MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠的血清和肝脏组织 | 第50页 |
| 1.3 抗体 | 第50-51页 |
| 1.4 引物及其序列 | 第51页 |
| 1.5 其他主要试剂和材料 | 第51-52页 |
| 1.6 仪器设备 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| 2.1 MCD饮食诱导的小鼠NASH模型的建立 | 第53-54页 |
| 2.2 小鼠血清ALT检测 | 第54页 |
| 2.3 肝脏甘油三脂提取和检测 | 第54-55页 |
| 2.4 RNA提取 | 第55页 |
| 2.5 qPCR检测 | 第55页 |
| 2.6 羟脯氨酸含量检测 | 第55页 |
| 2.7 HE染色 | 第55页 |
| 2.8 油红O染色 | 第55-56页 |
| 2.9 天狼星红染色 | 第56页 |
| 2.10 免疫组织化学染色 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-60页 |
| 3.1 GSDMD-N在MCD饮食诱导的NASH小鼠肝脏组织中显著高表达 | 第57页 |
| 3.2 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠血清ALT,肝脏甘油三酯水平明显下调 | 第57-58页 |
| 3.3 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏脂肪变和炎症反应程度明显减轻 | 第58-59页 |
| 3.4 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏纤维化程度明显减轻 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第三部分 GSDMD促进MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏巨噬细胞浸润和NF-?B信号转导通路的激活 | 第62-73页 |
| 1 材料 | 第62-66页 |
| 1.1 MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏组织 | 第62-63页 |
| 1.2 抗体 | 第63页 |
| 1.3 引物及其序列 | 第63页 |
| 1.4 其他主要试剂和材料 | 第63-65页 |
| 1.5 仪器设备 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-67页 |
| 2.1 小鼠腹腔巨噬细胞提取和回输 | 第66页 |
| 2.2 ELISA | 第66-67页 |
| 2.3 免疫组织化学染色 | 第67页 |
| 2.4 总蛋白提取 | 第67页 |
| 2.5 免疫蛋白印记 | 第67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| 3.1 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏促炎因子的表达明显下调 | 第67-68页 |
| 3.2 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏巨噬细胞浸润明显减轻 | 第68页 |
| 3.3 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏NF-?B信号转导通路的激活程度明显减轻 | 第68-69页 |
| 3.4 将WT小鼠的巨噬细胞回输入GSDMD~(-/-)小鼠体内后,促进GSDMD~(-/-)小鼠肝脏NF-?B信号转导通路的激活 | 第69-70页 |
| 3.5 与WT小鼠相比,MCD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏CD4~+T细胞和CD8~+T细胞浸润无明显差异 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 第四部分 GSDMD通过促进脂肪合成相关基因SREBP-1的表达,抑制脂肪分解相关基因CYP4A10,CYP4A14,PPARΑ的表达从而促进MCD饮食诱导的肝脏脂肪变性 | 第73-79页 |
| 1 材料 | 第73-75页 |
| 1.1 MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠的肝脏组织 | 第73页 |
| 1.2 引物及其序列 | 第73-74页 |
| 1.3 其他主要试剂和材料 | 第74页 |
| 1.4 仪器设备 | 第74-75页 |
| 2 方法 | 第75-76页 |
| 2.1 RNA提取 | 第75-76页 |
| 2.2 cDNA合成 | 第76页 |
| 2.3 qPCR检测 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-77页 |
| 3.1 GSDMD促进脂肪合成基因SREBP-1c的表达 | 第76页 |
| 3.2 GSDMD抑制脂肪分解基因ACO,LCAD,Cyp4a10,Cyp4a14,PPARα的表达 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 第五部分 GSDMD通过介导细胞焦亡促进非酒精性脂肪性肝炎的发展 | 第79-95页 |
| 1 材料 | 第79-83页 |
| 1.1 细胞株 | 第79页 |
| 1.2 质粒 | 第79页 |
| 1.3 腺相关病毒 | 第79页 |
| 1.4 抗体 | 第79-80页 |
| 1.5 MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠的血清和肝脏组织 | 第80页 |
| 1.6 其他主要试剂和材料 | 第80-83页 |
| 2 方法 | 第83-89页 |
| 2.1 细胞培养和处理 | 第83-84页 |
| 2.2 质粒扩增和质粒提取 | 第84-85页 |
| 2.3 质粒转染 | 第85页 |
| 2.4 构建肝脏过表达GSDMD-N腺相关病毒的Alb-cre小鼠 | 第85-86页 |
| 2.5 血清ALT检测 | 第86页 |
| 2.6 肝脏甘油三酯检测 | 第86页 |
| 2.7 TBARS检测 | 第86页 |
| 2.8 HE染色 | 第86页 |
| 2.9 RNA提取 | 第86页 |
| 2.10 总蛋白提取 | 第86-87页 |
| 2.11 核蛋白提取 | 第87页 |
| 2.12 PCRarray检测 | 第87页 |
| 2.13 免疫蛋白印记 | 第87-88页 |
| 2.14 NF-?Bp65活性测定 | 第88-89页 |
| 3 结果 | 第89-93页 |
| 3.1 GV362质粒载体示意图 | 第89页 |
| 3.2 GSDMD-N促进AML-12肝细胞的损伤和脂肪变 | 第89页 |
| 3.3 抗IL-1β和TNF-α中和抗体抑制GSDMD-N介导的AML-12肝细胞NF-?B信号转导通路的激活 | 第89-90页 |
| 3.4 构建肝脏过表达GSDMD-N腺相关病毒的Alb-cre小鼠示意图 | 第90页 |
| 3.5 与AAV9-FLEX-controlAlb-cre小鼠相比,MCD饮食诱导的AAV9-FLEX-GSDMD-NAlb-cre小鼠血清ALT和肝脏甘油三酯明显上调,NF-?B信号转导通路明显激活 | 第90-91页 |
| 3.6 与AAV9-FLEX-controlAlb-cre小鼠相比,MCD饮食诱导的AAV9-FLEX-GSDMD-NAlb-cre小鼠肝脏炎症细胞浸润和脂肪变明显加重 | 第91-92页 |
| 3.7 与AAV9-FLEX-controlAlb-cre小鼠相比,MCD饮食诱导的AAV9-FLEX-GSDMD-NAlb-cre小鼠肝脏促炎因子的表达明显上调 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 第六部分 GSDMD促进HFD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病的发生、发展 | 第95-101页 |
| 1 材料 | 第95-98页 |
| 1.1 HFD饮食 | 第95-96页 |
| 1.2 HFD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠的血清和肝脏组织 | 第96页 |
| 1.3 抗体 | 第96页 |
| 1.4 其他主要试剂和材料 | 第96-97页 |
| 1.5 仪器设备 | 第97-98页 |
| 2 方法 | 第98页 |
| 2.1 肝脏甘油三酯检测 | 第98页 |
| 2.2 HE染色 | 第98页 |
| 2.3 总蛋白提取 | 第98页 |
| 2.4 免疫蛋白印记 | 第98页 |
| 3 结果 | 第98-99页 |
| 3.1 GSDMD-N在长期HFD饮食诱导的小鼠肝脏组织中显著高表达 | 第98-99页 |
| 3.2 与WT小鼠相比,HFD饮食诱导的GSDMD~(-/-)小鼠肝脏甘油三酯水平明显下调,肝脏脂肪变性明显减轻 | 第99页 |
| 4 讨论 | 第99-101页 |
| 小结 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-116页 |
| 个人简历和研究成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
