| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 T细胞发育 | 第13-16页 |
| 1.1.1 T细胞发育中的阴性选择和阳性选择 | 第13-14页 |
| 1.1.2 TCR信号对T细胞发育的影响 | 第14-16页 |
| 1.2 THEMIS | 第16-21页 |
| 1.2.1 THEMIS家族及其结构特点 | 第16-17页 |
| 1.2.2 THEMIS参与TCR信号的传递 | 第17-19页 |
| 1.2.3 THEMIS在T细胞发育中的作用 | 第19-21页 |
| 1.3 Treg | 第21-25页 |
| 1.3.1 Treg的发育 | 第21-22页 |
| 1.3.2 FOXP3 | 第22-25页 |
| 1.3.2.1 FOXP3家族及结构 | 第22-23页 |
| 1.3.2.2 FOXP3调控基因 | 第23-24页 |
| 1.3.2.3 FOXP3抑制复合物 | 第24-25页 |
| 1.4 PMA与ionomycin | 第25-27页 |
| 1.4.1 PMA/ionomycin在T细胞刺激中的作用原理 | 第25-26页 |
| 1.4.2 NF-κB与免疫反应 | 第26-27页 |
| 1.4.3 PMA/ionomycin与NF-κB | 第27页 |
| 1.5 立题背景 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验相关试剂 | 第28页 |
| 2.1.2 实验相关仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-46页 |
| 2.2.1 相关质粒的构建 | 第29-34页 |
| 2.2.1.1 表达载体及其改造 | 第29-32页 |
| 2.2.1.2 DNA/cDNA白的获取 | 第32页 |
| 2.2.1.3 聚合酶链式反应PCR | 第32-33页 |
| 2.2.1.4 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第33页 |
| 2.2.1.5 载体酶切及产物连接 | 第33-34页 |
| 2.2.1.6 转化与涂板 | 第34页 |
| 2.2.1.7 中量提取质粒 | 第34页 |
| 2.2.2 基因生物学分析 | 第34页 |
| 2.2.3 相关细胞实验 | 第34-37页 |
| 2.2.3.1 实验相关细胞及培养条件 | 第34-35页 |
| 2.2.3.2 细胞培养液的配制 | 第35-36页 |
| 2.2.3.3 细胞复苏 | 第36页 |
| 2.2.3.4 PEI法转染293T细胞 | 第36页 |
| 2.2.3.5 电穿孔法转染Jurkat细胞 | 第36-37页 |
| 2.2.3.6 流式细胞术检测 | 第37页 |
| 2.2.4 CD4+T细胞纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.2.5.1 RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.2.5.2 RNA逆转录及上机检测 | 第39-40页 |
| 2.2.6 荧光素酶报告基因实验 | 第40-41页 |
| 2.2.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第41-42页 |
| 2.2.8 核质分离 | 第42页 |
| 2.2.9 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第42-43页 |
| 2.2.10 染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第43-44页 |
| 2.2.11 电泳迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA) | 第44-46页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第46-68页 |
| 3.1 THEMIS的表达具有细胞特异性 | 第46-48页 |
| 3.2 TCR通路的活化与PMA/ionomycin刺激均能调控THEMIS蛋白的表达 | 第48-50页 |
| 3.3 THEMIS 5'非翻译区基因结构分析及启动子区域在人、鼠间的同源性比较 | 第50-52页 |
| 3.4 THEMIS核心启动子 | 第52-54页 |
| 3.5 影响THEMIS表达的转录调控因子 | 第54-63页 |
| 3.5.1 FOXP3是THEMIS表达的间接负调控因子 | 第54-59页 |
| 3.5.2 NFKB亚基P65是THEMIS表达的直接正调控因子 | 第59-61页 |
| 3.5.3 FOXP3可能与p65相互作用共同调节THEMIS的表达 | 第61-63页 |
| 3.6 小结与讨论 | 第63-68页 |
| 附录. 实验相关引物 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
