| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 引言 | 第8-20页 |
| 1.1 红色荧光蛋白与远红外荧光蛋白 | 第8-12页 |
| 1.1.1 红色荧光蛋白的特性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 远红外荧光蛋白的特性 | 第10-12页 |
| 1.1.3 红色荧光蛋白和远红外荧光蛋白的进化关系 | 第12页 |
| 1.2 红色荧光蛋白的相关应用 | 第12-16页 |
| 1.2.1 显像技术 | 第13-14页 |
| 1.2.2 生物传感器和双分子荧光互补 | 第14-15页 |
| 1.2.3 深部组织成像 | 第15页 |
| 1.2.4 报告基因 | 第15-16页 |
| 1.3 红色荧光蛋白结构和机制 | 第16-17页 |
| 1.3.1 蛋白结构和机制 | 第16页 |
| 1.3.2 保守的发色团共价结构 | 第16-17页 |
| 1.4 smURFP蛋白的简介和特性 | 第17-18页 |
| 1.5 研究内容与意义 | 第18-20页 |
| 第2章 smURFP的蛋白制备 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验仪器及实验耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验菌株与实验质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 实验工具酶与实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 常用培养基及缓冲液配置 | 第22-24页 |
| 2.2 实验原理 | 第24-27页 |
| 2.2.1 蛋白质的表达 | 第24-25页 |
| 2.2.2 蛋白质的纯化 | 第25-27页 |
| 2.2.2.1 亲和层析 | 第25页 |
| 2.2.2.2 离子交换层析 | 第25-26页 |
| 2.2.2.3 凝胶过滤层析 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3.1 smURFP基本信息 | 第27-28页 |
| 2.3.2 smURFP蛋白表达载体构建 | 第28-31页 |
| 2.3.2.1 基因克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 表达载体构建 | 第29-31页 |
| 2.3.3 smURFP蛋白的表达 | 第31页 |
| 2.3.4 smURFP蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.4.1 smURFP蛋白表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.4.2 smURFP蛋白的表达和纯化 | 第33-36页 |
| 第3章 smURFP的荧光活性研究 | 第36-40页 |
| 3.1 荧光测定实验原理 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 第4章 smURFP的结构研究 | 第40-52页 |
| 4.1 实验原理 | 第40-42页 |
| 4.1.1 蛋白结晶学 | 第40-41页 |
| 4.1.2 结构解析原理 | 第41-42页 |
| 4.1.2.1 晶体X衍射基本原理 | 第41-42页 |
| 4.1.2.2 分子置换方法 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 smURFP蛋白的结晶 | 第42-43页 |
| 4.2.1.1 蛋白的结晶条件筛选 | 第42-43页 |
| 4.2.1.2 蛋白的晶体优化 | 第43页 |
| 4.2.2 smURFP蛋白晶体的衍射数据收集与处理 | 第43页 |
| 4.2.3 smURFP蛋白晶体的分子置换法结构解析 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-52页 |
| 4.3.1 smURFP蛋白的结晶 | 第43-44页 |
| 4.3.2 smURFP蛋白晶体的衍射数据收集与处理 | 第44-46页 |
| 4.3.2.1 smURFP蛋白晶体的衍射数据收集 | 第44-45页 |
| 4.3.2.2 smURFP蛋白晶体的衍射数据处理 | 第45-46页 |
| 4.3.3 smURFP蛋白晶体的分子置换法结构解析 | 第46-47页 |
| 4.3.4 smURFP的高分辨率三维空间结构 | 第47-52页 |
| 第5章 smURFP与 BV的复合物结构研究 | 第52-62页 |
| 5.1 实验原理 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 5.2.1 smURFP蛋白与BV的孵育结晶 | 第53-54页 |
| 5.2.2 smURFP蛋白与亚铁血红素氧化酶1 蛋白的共表达 | 第54-56页 |
| 5.2.2.1 共表达基因序列如下 | 第54-55页 |
| 5.2.2.2 共表达蛋白表达载体构建 | 第55页 |
| 5.2.2.3 共表达克隆的表达和纯化 | 第55-56页 |
| 5.2.2.4 共表达蛋白的晶体初筛和优化 | 第56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-62页 |
| 5.3.1 smURFP蛋白与BV的孵育结晶 | 第57-58页 |
| 5.3.2 smURFP蛋白与亚铁血红素氧化酶1 蛋白的共表达 | 第58-62页 |
| 5.3.2.1 共表达蛋白表达载体构建 | 第58页 |
| 5.3.2.2 共表达克隆的表达和纯化 | 第58-60页 |
| 5.3.2.3 共表达蛋白的晶体初筛和优化 | 第60-62页 |
| 第6章 结论和意义 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第72-74页 |
| 发表论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
