| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 HDA的概念与原理 | 第9-10页 |
| 1.2 HDA的研究现状与应用 | 第10-16页 |
| 1.2.1 HDA的研究现状 | 第10-14页 |
| 1.2.2 HDA的优点与不足 | 第14-15页 |
| 1.2.3 HDA的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 本课题的研究内容与思路 | 第16-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-29页 |
| 2.1.1 实验引物和模板 | 第19-21页 |
| 2.1.2 实验菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第23-25页 |
| 2.1.5 培养基与实验溶液 | 第25-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-47页 |
| 2.2.1 模板制备方法 | 第29-30页 |
| 2.2.2 蛋白纯化质粒构建 | 第30-39页 |
| 2.2.3 重组蛋白表达纯化 | 第39-44页 |
| 2.2.4 HDA体系反应方法 | 第44-47页 |
| 第3章 特定末端序列引物对HDA效率的影响 | 第47-61页 |
| 3.1 前言与背景 | 第47-48页 |
| 3.2 HDA反应方法的建立 | 第48-53页 |
| 3.2.1 HDA一步反应法的建立 | 第48页 |
| 3.2.2 HDA两步反应法的建立 | 第48-49页 |
| 3.2.3 质粒模板HDA反应法的建立 | 第49-50页 |
| 3.2.4 基因组模板HDA反应法的建立 | 第50-53页 |
| 3.2.5 结果与讨论 | 第53页 |
| 3.3 设计特定末端序列的引物提高HDA效率 | 第53-61页 |
| 3.3.1 Poly(A)对HDA的影响 | 第53-56页 |
| 3.3.2 Poly(C)对HDA的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 Poly(AC)对HDA的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.4 结果与讨论 | 第58-61页 |
| 第4章 不同解旋酶对HDA的影响 | 第61-103页 |
| 4.1 前言与背景 | 第61-62页 |
| 4.2 蛋白制备结果 | 第62-88页 |
| 4.2.1 单链结合蛋白(SSB)的制备 | 第62-64页 |
| 4.2.2 大肠杆菌UvrD解旋酶的制备 | 第64-70页 |
| 4.2.3 辅助蛋白MutL的制备 | 第70-73页 |
| 4.2.4 嗜热菌UvrD解旋酶的制备 | 第73-75页 |
| 4.2.5 解旋酶PcrA蛋白的制备 | 第75-82页 |
| 4.2.6 RepC蛋白的制备 | 第82-86页 |
| 4.2.7 纯化蛋白分析 | 第86-87页 |
| 4.2.8 结果与讨论 | 第87-88页 |
| 4.3 用不同种类解旋酶进行HDA扩增 | 第88-103页 |
| 4.3.1 HDA体系配置和优化 | 第88-99页 |
| 4.3.2 基于PcrA解旋酶配置HDA体系 | 第99-100页 |
| 4.3.3 基于Tth-UvrD解旋酶配置HDA体系 | 第100-101页 |
| 4.3.4 结果与讨论 | 第101-103页 |
| 第5章 结论与展望 | 第103-107页 |
| 5.1 结论 | 第103-104页 |
| 5.2 展望 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-114页 |
| 附录 | 第114-116页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |