| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第1章 引言 | 第9-25页 |
| 1.1 骨形态发生蛋白 | 第9-12页 |
| 1.1.1 骨形态发生蛋白概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 骨形态发生蛋白的结构 | 第10页 |
| 1.1.3 骨形态发生蛋白-4 | 第10-11页 |
| 1.1.4 骨形态发生蛋白的信号通路 | 第11-12页 |
| 1.2 骨形态发生蛋白-1 | 第12-15页 |
| 1.2.1 骨形态发生蛋白-1/Tolloid蛋白家族 | 第12-13页 |
| 1.2.2 骨形态发生蛋白-1的结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 骨形态发生蛋白-1的功能 | 第14-15页 |
| 1.3 骨形态发生蛋白的拮抗剂 | 第15-16页 |
| 1.3.1 脊索发生素(Chordin) | 第15页 |
| 1.3.2 BMP-1/CHRD/BMP三元作用网络模型 | 第15-16页 |
| 1.4 BMP浓度梯度的形成 | 第16-20页 |
| 1.4.1 形态发生素 | 第16-17页 |
| 1.4.2 胚轴的确定 | 第17-18页 |
| 1.4.3 BMP浓度梯度的建立 | 第18-19页 |
| 1.4.4 BMP(Dpp)浓度梯度的拟合 | 第19-20页 |
| 1.5 胚胎的分化模式 | 第20-21页 |
| 1.6 BMP-1与BMP-4 的相互作用 | 第21-23页 |
| 1.6.1 BMP-1对BMP信号的调控 | 第21-22页 |
| 1.6.2 BMP-4对BMP-1 的抑制作用 | 第22页 |
| 1.6.3 结构上的分析 | 第22-23页 |
| 1.7 BMP-1/CHRD/BMP机制的保守性 | 第23-24页 |
| 1.8 研究目标及意义 | 第24-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-32页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 表达载体 | 第25页 |
| 2.1.3 基因 | 第25-26页 |
| 2.1.4 细胞 | 第26页 |
| 2.1.5 分子克隆试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.6 细胞培养试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.7 蛋白纯化试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.8 功能实验试剂 | 第30页 |
| 2.1.9 仪器 | 第30-32页 |
| 2.2 实验材料的配制 | 第32-35页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.2 细胞培养及蛋白表达 | 第33-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-53页 |
| 2.3.1 载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.3.2 表达载体的构建 | 第38-42页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第42-44页 |
| 2.3.4 蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.3.5 悬浮培养基大规模表达 | 第45-47页 |
| 2.3.6 稳态细胞株的构建 | 第47-49页 |
| 2.3.7 蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.8 BMP-1的水解酶活性实验 | 第50-51页 |
| 2.3.9 BMP-4的碱性磷酸酶活性实验 | 第51-53页 |
| 第3章 BMP-1、BMP-4 的表达、纯化与功能研究 | 第53-75页 |
| 3.1 真核表达载体的选择与改良 | 第53-55页 |
| 3.1.1 EBNA与 OriP | 第53-54页 |
| 3.1.2 真核表达载体pTT5及pTT5-puro的构建 | 第54-55页 |
| 3.2 BMP-1、BMP-4 的构建结果 | 第55-57页 |
| 3.2.1 BMP-1 的构建结果 | 第55-57页 |
| 3.2.2 BMP-4 的构建结果 | 第57页 |
| 3.3 BMP-1、BMP-4 在哺乳动物细胞上的表达 | 第57-61页 |
| 3.3.1 蛋白的试表达以及表达条件 | 第57-59页 |
| 3.3.2 上清水平的蛋白质活性检测 | 第59-61页 |
| 3.4 BMP-1 的大规模表达 | 第61-62页 |
| 3.4.1 BMP-1 悬浮转染的条件优化 | 第61-62页 |
| 3.4.2 BMP-1 的大规模转染 | 第62页 |
| 3.5 高表达BMP-4 的稳态细胞株的建立 | 第62-66页 |
| 3.5.1 用药浓度的确定 | 第62页 |
| 3.5.2 转染及初筛 | 第62-64页 |
| 3.5.3 稳态细胞株的复筛 | 第64-65页 |
| 3.5.4 稳态细胞株的驯化 | 第65页 |
| 3.5.5 依照BMP-4 活性水平的筛选 | 第65-66页 |
| 3.6 BMP-1 的纯化 | 第66-71页 |
| 3.6.2 BMP-1的Ni柱纯化实验的改良 | 第67-69页 |
| 3.6.3 对BMP-1 上清的研究 | 第69-70页 |
| 3.6.4 BMP-1 纯化方案的进一步尝试 | 第70页 |
| 3.6.5 对BMP-1 上清的进一步研究 | 第70-71页 |
| 3.7 BMP-4 的纯化 | 第71-72页 |
| 3.8 BMP-1活性实验 | 第72-74页 |
| 3.9 纯化的BMP-4的活性实验 | 第74-75页 |
| 第4章 研究结论 | 第75-77页 |
| 4.1 悬浮瞬态转染表达体系的建立 | 第75页 |
| 4.2 稳态细胞株筛选方案的建立 | 第75-77页 |
| 第5章 实验分析与讨论 | 第77-79页 |
| 5.1 BMP-1 纯化的分析 | 第77-78页 |
| 5.2 293E细胞株的讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附录 | 第85-91页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
