| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 二化螟的危害及防治现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 二化螟的危害概况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 二化螟防治现状 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 化学防治 | 第14页 |
| 1.1.2.2 二化螟的绿色防控技术 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 香根草防治二化螟 | 第15-16页 |
| 1.2 细胞色素P450概况 | 第16-17页 |
| 1.2.1 细胞色素P450的命名 | 第16页 |
| 1.2.2 昆虫细胞色素P450的功能及分布 | 第16-17页 |
| 1.2.3 昆虫细胞色素P450的表达调控机制 | 第17页 |
| 1.3 昆虫RNAi(RNA interference)概述 | 第17-20页 |
| 1.3.1 昆虫RNAi的作用机制 | 第18页 |
| 1.3.2 昆虫RNAi的实现方法 | 第18-19页 |
| 1.3.3 RNAi技术在昆虫中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 二化螟CsCYP6A2、CsCYP306A1基因的克隆及序列分析 | 第21-35页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 供试虫源与饲养 | 第22页 |
| 2.2.2 主要仪器与试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 RNA-Seq测序 | 第23页 |
| 2.2.5 序列分析方法 | 第23-24页 |
| 2.3 结果 | 第24-32页 |
| 2.3.1 总RNA的提取结果 | 第24页 |
| 2.3.2 二化螟两种P450基因的cDNA序列 | 第24页 |
| 2.3.3 二化螟两种P450基因与8种昆虫P450基因氨基酸序列同源性比较 | 第24-25页 |
| 2.3.4 二化螟CsCYPA2和CsCYP306A1基因的系统发育树分析 | 第25-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-35页 |
| 3 二化螟CsCYP6A2、CsCYP306A1基因的时空表达谱及取食香根草对其表达的影响 | 第35-49页 |
| 3.1 前言 | 第35-36页 |
| 3.2 材料和方法 | 第36-42页 |
| 3.2.1 供试昆虫 | 第36页 |
| 3.2.2 供试植物 | 第36页 |
| 3.2.3 样本收集 | 第36-37页 |
| 3.2.4 仪器与试剂 | 第37页 |
| 3.2.5 总RNA的提取 | 第37页 |
| 3.2.6 cDNA第一条链的合成 | 第37-39页 |
| 3.2.7 基因引物设计及Real-Time PCR | 第39-41页 |
| 3.2.8 数据分析 | 第41-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-47页 |
| 3.3.1 引物设计结果 | 第42页 |
| 3.3.2 CsCYP6A2和CsCYP306A1在二化螟不同发育阶段的表达分析 | 第42-44页 |
| 3.3.3 取食香根草不同时间后对二化螟CsCYP6A2和CsCYP306A1基因表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4 取食香根草对二化螟不同组织CsCYP6A2和CsCYP306A1基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4 CsCYP6A2和CsCYP306A1基因在香根草对二化螟致死作用中的功能 | 第49-65页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 材料和方法 | 第49-55页 |
| 4.2.1 供试虫源与饲养 | 第49-50页 |
| 4.2.2 供试植物 | 第50页 |
| 4.2.3 主要仪器与试剂 | 第50页 |
| 4.2.4 含T7启动子的模板DNA制备 | 第50-52页 |
| 4.2.4.1 含T7启动子引物设计 | 第50页 |
| 4.2.4.2 总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第50-51页 |
| 4.2.4.3 T7引物PCR扩增 | 第51-52页 |
| 4.2.4.4 PCR产物切胶回收纯化 | 第52页 |
| 4.2.5 dsRNA的制备 | 第52-54页 |
| 4.2.5.1 洗涤液准备 | 第52页 |
| 4.2.5.2 体外转录反应 | 第52-53页 |
| 4.2.5.3 核酸酶消化去除模板DNA和ssRNA | 第53-54页 |
| 4.2.5.4 dsRNA的纯化 | 第54页 |
| 4.2.5.5 dsRNA质量和浓度检测 | 第54页 |
| 4.2.6 dsRNA的注射方法 | 第54-55页 |
| 4.2.6.1 二化螟三龄幼虫注射方法 | 第54-55页 |
| 4.2.6.2 沉默两种细胞色素P450基因对二化螟取食香根草的影响 | 第55页 |
| 4.2.7 目的基因干扰结果检测 | 第55页 |
| 4.2.8 数据分析 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 dsRNA的合成 | 第55-56页 |
| 4.3.2 目的基因干扰后二化螟mRNA水平的沉默效果及表型变化 | 第56-60页 |
| 4.3.2.1 RNAi后幼虫两天后的死亡率 | 第56-57页 |
| 4.3.2.2 RNAi后检测mRNA水平的沉默效果 | 第57-58页 |
| 4.3.2.3 RNAi后二化螟的化蛹率、蛹重及蛹的羽化率 | 第58-60页 |
| 4.3.3 目的基因干扰后分别饲喂水稻和香根草后二化螟表型变化及对mRNA表达影响 | 第60-62页 |
| 4.3.3.1 RNAi后幼虫的死亡率及表型 | 第60页 |
| 4.3.3.2 RNAi后检测二化螟试虫不同组织mRNA水平的沉默效果 | 第60-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-65页 |
| 5 总讨论 | 第65-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-85页 |
