| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 前言 | 第14页 |
| 1.2 研究背景 | 第14-16页 |
| 1.3 研究思路 | 第16-18页 |
| 1.4 研究方法 | 第18-20页 |
| 第二章 重组hTGF-β1在大肠杆菌系统中的构建与表达 | 第20-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌种 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基与缓冲液 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 重组hTGF-β1目的基因的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 重组质粒pET21b-hTGF-β1的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3 E.coliBL21(DE3)-hTGF-β1工程菌的构建 | 第24页 |
| 2.2.4 重组hTGF-β1表达形式的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 包涵体的收集、洗涤与裂解 | 第25页 |
| 2.2.6 变性条件下目的蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.7 目的蛋白的复性 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-41页 |
| 2.3.0 hTGF-β1的基因设计与扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.1 目的基因与表达载体双酶切及其胶回收 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组质粒pET21b-hTGF-β1的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组质粒转化E.coliDH5α | 第29-30页 |
| 2.3.4 菌落PCR及基因测序鉴定重组子 | 第30-31页 |
| 2.3.5 高表达菌株的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.6 表达形式分析 | 第32-33页 |
| 2.3.7 包涵体的收集、洗涤与裂解 | 第33-34页 |
| 2.3.8 离子交换层析平衡液pH值的研究 | 第34-35页 |
| 2.3.9 离子交换层析洗脱液盐浓度的研究 | 第35-38页 |
| 2.3.10 分子筛层析分离纯化目的蛋白 | 第38-39页 |
| 2.3.11 变性蛋白的复性 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 突变型重组hTGF-β1/C77S在毕赤酵母中的构建与表达 | 第44-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.1.1 菌种 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.1.4 培养基与缓冲液 | 第45-46页 |
| 3.2 方法 | 第46-49页 |
| 3.2.1 突变型重组hTGF-β1/C77S目的基因的设计与合成 | 第46页 |
| 3.2.2 重组质粒pGAPzαA-hTGF-β1/C77S的构建 | 第46页 |
| 3.2.3 PichiaX33-hTGF-β1/C77S工程菌的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.4 PichiaX33-hTGF-β1/C77S工程菌的表达鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-57页 |
| 3.3.1 hTGF-β1/C77S基因的设计与扩增 | 第49-51页 |
| 3.3.2 重组质粒pGAPzαA-hTGF-β1/C77S的构建 | 第51页 |
| 3.3.3 重组质粒转化E.coliDH5α及重组子的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.4 重组质粒的线性化 | 第52-53页 |
| 3.3.5 电转化PichiaX33 | 第53-54页 |
| 3.3.6 高拷贝重组子的筛选 | 第54页 |
| 3.3.7 PCR法鉴定重组子 | 第54-55页 |
| 3.3.8 目的蛋白表达的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.9 目的蛋白表达的免疫点印迹鉴定 | 第56页 |
| 3.3.10 目的蛋白表达的WestonBlot鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 重组hTGF-β1的生物学活性检测 | 第59-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 细胞 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第59页 |
| 4.1.4 培养基与细胞培养用溶液 | 第59-60页 |
| 4.2 方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第60页 |
| 4.2.2 MTT法检测细胞增殖抑制 | 第60-61页 |
| 4.2.3 碱裂解法检测黑色素生成抑制率 | 第61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-63页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第61页 |
| 4.3.2 制备hTGF-β1对B16-F10细胞的增值抑制作用 | 第61-62页 |
| 4.3.3 制备hTGF-β1对黑色素生成的抑制作用 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-66页 |
| 5.1 结论 | 第65页 |
| 5.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 英文缩略词对照表 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
