| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩写词 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 莲腐败病的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 莲腐败病的概述 | 第9页 |
| 1.1.2 莲腐败病菌的生物学特性 | 第9页 |
| 1.1.3 莲腐败病的症状 | 第9-10页 |
| 1.1.4 莲腐败病的发生规律 | 第10页 |
| 1.1.5 发病主要因素 | 第10页 |
| 1.1.6 莲腐败病的防治 | 第10-11页 |
| 1.2 尖孢镰刀菌的致病机制 | 第11-13页 |
| 1.2.1 信号传导物质 | 第11-12页 |
| 1.2.2 毒素 | 第12页 |
| 1.2.3 细胞壁降解酶 | 第12-13页 |
| 1.3 尖孢镰刀菌致病因子的研究概况 | 第13页 |
| 1.3.1 多聚半乳糖醛酸酶的研究进展 | 第13页 |
| 1.4 本课题来源及研究内容 | 第13-14页 |
| 1.4.1 课题来源 | 第13-14页 |
| 1.4.2 主要内容 | 第14页 |
| 1.5 实验目的意义及技术路线 | 第14-15页 |
| 1.5.1 实验目的及意义 | 第14页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第14-15页 |
| 第二章 莲腐败病菌细胞壁降解酶活性的测定 | 第15-23页 |
| 2.1 细胞壁降解酶的概况 | 第15页 |
| 2.2 材料与方法 | 第15-18页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.2.2 材料及试剂 | 第16页 |
| 2.2.3 酶测定方法 | 第16-18页 |
| 2.3 结果与分析 | 第18-21页 |
| 2.3.1 标准曲线 | 第18页 |
| 2.3.2 D-半乳糖醛酸和葡萄糖标准曲线 | 第18-19页 |
| 2.3.3 酶活性分析 | 第19-20页 |
| 2.3.4 温度对PMTE和PGTE酶活的影响 | 第20-21页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第21-23页 |
| 第三章 莲腐败病菌PG同工酶基因的克隆及序列分析 | 第23-37页 |
| 3.1 材料与方法 | 第23-31页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第23页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 3.1.3 载体及菌株 | 第23-24页 |
| 3.1.4 主要培养基及溶液的配制 | 第24页 |
| 3.1.5 病菌的培养 | 第24页 |
| 3.1.6 PG同工酶全长引物的设计 | 第24-25页 |
| 3.1.7 病菌总DNA的提取 | 第25页 |
| 3.1.8 病菌总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.1.9 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 3.1.10 PG同工酶cDNA全长序列的扩增 | 第26-28页 |
| 3.1.11 PG同工酶DNA序列的扩增 | 第28页 |
| 3.1.12 克隆测序 | 第28-31页 |
| 3.2 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.2.1 RNA提取结果 | 第31页 |
| 3.2.2 pg1基因的克隆与序列分析 | 第31-33页 |
| 3.2.3 pg5基因的克隆与序列分析 | 第33-34页 |
| 3.2.4 PG同工酶基因的系谱分析 | 第34-35页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 莲腐败病菌PG同工酶基因的原核表达 | 第37-44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 原核表达载体及菌株 | 第37页 |
| 4.1.4 主要培养基及溶液的配制 | 第37-38页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第38页 |
| 4.1.6 原核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 4.1.7 重组质粒的诱导表达 | 第40页 |
| 4.1.8 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达产物 | 第40页 |
| 4.1.9 考马斯亮蓝R-250对蛋白染色 | 第40-41页 |
| 4.2 结果与分析 | 第41-42页 |
| 4.2.1 PET-30a-pg1和PET-30a-pg5重组载体的构建 | 第41页 |
| 4.2.2 pg1和pg5基因表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| 4.3 结论与讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 总结与展望 | 第44-46页 |
| 5.1 总结 | 第44-45页 |
| 5.1.1 莲腐败病菌细胞壁降解酶的活性比较 | 第44页 |
| 5.1.2 莲腐败病菌PG同工酶基因的克隆 | 第44页 |
| 5.1.3 莲腐败病菌PG同工酶基因的原核表达 | 第44-45页 |
| 5.2 展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
