| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 σ因子 | 第7页 |
| 1.2 谷氨酸棒杆菌中的选择性σ因子 | 第7-11页 |
| 1.2.1 σ~B | 第8页 |
| 1.2.2 σ~C和σ~D | 第8-9页 |
| 1.2.3 σ~H | 第9-10页 |
| 1.2.4 σ~M | 第10-11页 |
| 1.2.5 σ~E | 第11页 |
| 1.3 σ因子研究中需要注意的问题 | 第11-13页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-19页 |
| 2.1 实验材料 | 第14页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基和培养条件 | 第14页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第14页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第14页 |
| 2.2 实验方法 | 第14-19页 |
| 2.2.1 基本的分子生物学实验操作 | 第14-15页 |
| 2.2.2 质粒构建与基因敲除 | 第15-16页 |
| 2.2.3 胁迫处理 | 第16-17页 |
| 2.2.4 RNA提取以及RT-qPCR | 第17页 |
| 2.2.5 cDNA5′末端快速扩增 | 第17页 |
| 2.2.6 染色质免疫共沉淀 | 第17-18页 |
| 2.2.7 生长曲线的绘制 | 第18页 |
| 2.2.8 乙醇胁迫敏感性测定 | 第18页 |
| 2.2.9 EGFP表达强度测定 | 第18页 |
| 2.2.10 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的制备 | 第18-19页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第19-36页 |
| 3.1 σ~E的生理功能鉴定 | 第19-24页 |
| 3.1.1 不同胁迫下各σ因子mRNA表达水平 | 第19-21页 |
| 3.1.2 乙醇胁迫敏感性试验 | 第21-22页 |
| 3.1.3 sigE敲除对菌体聚集度和生长的影响 | 第22-23页 |
| 3.1.4 不同生长阶段下sigE的mRNA表达水平 | 第23-24页 |
| 3.2 σ~E对sigB的调控研究 | 第24-25页 |
| 3.2.1 σ~E的敲除和过表达在转录水平对sigB的影响 | 第24-25页 |
| 3.2.2 ChIP实验验证σ~E对sigB的直接调控 | 第25页 |
| 3.2.3 sigE在乙醇胁迫中介导了sigB的表达 | 第25页 |
| 3.3 sigE-cseE的转录调控分析 | 第25-28页 |
| 3.3.1 5′RACEPCR鉴定sigE-cseE的转录起始位点 | 第25-26页 |
| 3.3.2 σ~E调控了cseE的转录 | 第26-27页 |
| 3.3.3 σ~E与σ~H的调控相关性 | 第27-28页 |
| 3.4 乙醇和σ~E的激活影响了外源蛋白表达 | 第28-31页 |
| 3.4.1 不同乙醇浓度对sigE启动子表达EGFP的影响 | 第28-29页 |
| 3.4.2 不同乙醇浓度对tac启动子表达EGFP的影响 | 第29-30页 |
| 3.4.3 cseE敲除影响了EGFP表达水平 | 第30-31页 |
| 3.5 低浓度乙醇在外源蛋白表达中的应用研究 | 第31-36页 |
| 3.5.1 低浓度乙醇诱导下的生长变化和荧光强度变化 | 第31-32页 |
| 3.5.2 乙酸无法替代乙醇诱导EGFP的表达 | 第32-33页 |
| 3.5.3 几种常见培养基的成本和效果比较 | 第33-34页 |
| 3.5.4 乙醇诱导启动子的构建 | 第34-36页 |
| 主要结论与展望 | 第36-37页 |
| 主要结论 | 第36页 |
| 展望 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 附录A:引物列表 | 第42-44页 |
| 附录B:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
