| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 核糖体 | 第11页 |
| 1.1.1 核糖体的发现及命名 | 第11页 |
| 1.2 核糖体的组成和结构以及功能 | 第11-15页 |
| 1.2.1 核糖体的组成 | 第11-12页 |
| 1.2.2 核糖体的结构 | 第12-14页 |
| 1.2.3 核糖体的发生及功能 | 第14-15页 |
| 1.3 RibosomeCode假说 | 第15-16页 |
| 1.4 酵母细胞的核糖蛋白RPL36A与RPL36B | 第16-17页 |
| 1.4.1 核糖蛋白RPL36A与RPL36B在染色体上的相对位置 | 第16页 |
| 1.4.2 核糖蛋白RPL36A与RPL36B蛋白序列的区别 | 第16-17页 |
| 1.5 生理条件改变对细胞的影响 | 第17页 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第19-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-31页 |
| 2.1.1 质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验所用菌种菌种 | 第20页 |
| 2.1.3 实验涉及到的化学试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3.1 SulfometuronMethyl(SM) | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21-25页 |
| 2.1.6 试剂的配制 | 第25-31页 |
| 2.1.6.1 酵母RNA抽提及电泳相关缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.6.2 Westernblot相关Buffer | 第26-28页 |
| 2.1.6.3 polysomeanalysisbuffer | 第28-29页 |
| 2.1.6.4 免疫共沉淀相关buffer和试剂 | 第29页 |
| 2.1.6.5 酵母基因组DNA提取相关试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.6.6 用于LacZ分析的相关缓冲液 | 第30页 |
| 2.1.6.7 抗体、短肽和Co-IP相关柱子 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 生物学软件分析 | 第31页 |
| 2.2.2 引物设计与PCR反应 | 第31-32页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第31页 |
| 2.2.2.2 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.3 DNA产物纯化试剂盒 | 第32页 |
| 2.2.3.1 普通DNA产物纯化试剂盒(TIANGEN) | 第32页 |
| 2.2.3.2 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(TIANGEN) | 第32页 |
| 2.2.4 质粒抽提试剂盒 | 第32页 |
| 2.2.5 酶切体系(TaKaRa) | 第32-33页 |
| 2.2.6 酶连体系(TaKaRa) | 第33页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第33-34页 |
| 2.2.7.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.7.2 大肠杆菌转化 | 第34页 |
| 2.2.8 大肠杆菌菌落PCR | 第34-35页 |
| 2.2.9 酵母的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.9.1 酵母电转化 | 第35页 |
| 2.2.9.2 酵母的化学转化 | 第35-36页 |
| 2.2.10 酵母菌菌落PCR | 第36-37页 |
| 2.2.11 Spottingassay | 第37-38页 |
| 2.2.12 polysomeanalysis | 第38-39页 |
| 2.2.13 利用天根RNA纯化试剂盒提取酵母polysomal和non-polysomalRNA以及IP的RNA | 第39页 |
| 2.2.14 Westernblot | 第39-41页 |
| 2.2.14.1 酵母总蛋白的提取 | 第39页 |
| 2.2.14.2 SDS-PAGE凝胶 | 第39-40页 |
| 2.2.14.3 转膜 | 第40-41页 |
| 2.2.14.4 封闭及抗体的孵育 | 第41页 |
| 2.2.14.5 蛋白检测 | 第41页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀(Co-IP)亲和纯化核糖体 | 第41-42页 |
| 第3章 结果与分析 | 第42-66页 |
| 3.1 课题前期工作介绍 | 第42-43页 |
| 3.2 实验结果 | 第43-66页 |
| 3.2.1 利用不同的报告基因检测在不同的生理条件下RPL36A+B+的翻译偏好性的变化 | 第43-44页 |
| 3.2.2 利用polysomeanalysis和免疫共沉淀技术分离核糖体 | 第44-47页 |
| 3.2.3 生理条件改变核糖体组成发生改变 | 第47-52页 |
| 3.2.3.1 RPL36A+B+在完全培养基(SC-Trp-His)和AAS下的数据分析 | 第47-50页 |
| 3.2.3.2 SC中和AAS当中同类型核糖体结合的蛋白的比对 | 第50-52页 |
| 3.2.4 同源基因编码的两类型核糖体功能不一样且在功能上是一种互补的关系 | 第52-57页 |
| 3.2.4.1 GO通路分析证实两类型核糖体功能有差别 | 第52-54页 |
| 3.2.4.2 翻译相关蛋白证实两类型核糖体功能存在差异 | 第54-56页 |
| 3.2.4.3 通过westernblot验证质谱数据的准确性 | 第56-57页 |
| 3.2.5 比较RPL36A+B+和pADH1-RPL36A+B+核糖体组成以及翻译表达情况 | 第57-66页 |
| 3.2.5.1 pADH1-RPL36A+B+相对于RPL36A+B+核糖体的组成变化 | 第57-58页 |
| 3.2.5.2 比较pADH1A+B+和A+B+在不同培养条件下的生理特性 | 第58-61页 |
| 3.2.5.3 RNA-seq表明改变基因启动子改变了细胞在全基因组上的翻译偏好性 | 第61-66页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第66-68页 |
| 4.1 讨论 | 第66-67页 |
| 4.2 展望 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录A | 第75-76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76页 |
