| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-13页 |
| 材料与方法 | 第13-26页 |
| 1 主要仪器 | 第13-14页 |
| 2 主要试剂及材料 | 第14-15页 |
| 3 受试细胞和动物 | 第15页 |
| 4 细胞培养 | 第15-16页 |
| 4.1 Caki-2,A498和HK-2细胞传代 | 第15-16页 |
| 4.2 人原代ccRCC细胞的分离培养 | 第16页 |
| 5 CCK-8检测高车前素对Caki-2、A498、HK-2以及原代培养肾癌细胞生存率影响 | 第16页 |
| 6 流式细胞仪检测高车前素对Caki-2和A498细胞凋亡的影响 | 第16-17页 |
| 7 Transwell检测高车前素对Caki-2和A498细胞迁移能力的影响 | 第17页 |
| 8 Transwell(含Matrigel)检测高车前素对Caki-2和A498细胞侵袭能力的影响. | 第17页 |
| 9 qRT-PCR检测高车前素对Caki-2和A498细胞内Sphk1mRNA表达水平影响 | 第17-20页 |
| 10 免疫印迹检测高车前素对Caki-2和A498细胞内蛋白表达水平影响 | 第20-22页 |
| 11 Ceramide和S1PELISA试剂盒检测高车前素对细胞内Ceramide和S1P水平的影响 | 第22页 |
| 12 Sphingosine kinase 1活性检测试剂盒检测高车前素对细胞内SphK1活性的影响 | 第22页 |
| 13 SphK1siRNA和SphK1过表达质粒的构建与转染 | 第22-23页 |
| 14 肾癌皮下荷瘤裸鼠模型的构建 | 第23页 |
| 15 免疫印迹检测高车前素对肿瘤组织中p-SphK1、Cleaved caspase-3和ki-67蛋白表达水平的影响 | 第23-25页 |
| 16 肾癌肺转移裸鼠模型的构建 | 第25页 |
| 17 TUNEL检测高车前素对裸鼠肿瘤组织中细胞凋亡情况的影响 | 第25页 |
| 18 统计学处理 | 第25-26页 |
| 实验结果 | 第26-50页 |
| 1 高车前素对Caki-2、A498、HK-2和原代肾癌细胞存活率的影响 | 第26-27页 |
| 2 高车前素对Caki-2和A498细胞凋亡的影响 | 第27-28页 |
| 3 高车前素对Caki-2和A498细胞内凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白水平表达的影响 | 第28-29页 |
| 4 高车前素对Caki-2和A498细胞迁移能力的影响 | 第29-30页 |
| 5 高车前素对Caki-2和A498细胞侵袭能力的影响 | 第30-31页 |
| 6 高车前素对Caki-2和A498细胞内E-cadherin和N-cadherin蛋白水平表达的影响 | 第31-32页 |
| 7 高车前素对Caki-2和A498细胞内Ceramide和S1P水平的影响 | 第32-33页 |
| 8 高车前素对Caki-2和A498细胞内SphK1活性的影响 | 第33-34页 |
| 9 高车前素对Caki-2和A498细胞内SphK1的表达及分布的影响 | 第34-36页 |
| 10 SphK1 siRNA和抑制剂SKI-Ⅱ对高车前素抗增殖活性的影响 | 第36-37页 |
| 11 SphK1 siRNA和抑制剂SKI-Ⅱ对高车前素凋亡诱导效应的影响 | 第37-38页 |
| 12 SphK1 siRNA和抑制剂SKI-Ⅱ对高车前素对细胞内Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 13 SphK1 siRNA和抑制剂SKI-Ⅱ对高车前素抗侵袭转移和EMT过程的影响 | 第39-41页 |
| 14 SphK1 vector和激动剂K6PC-5对高车前素抗增殖活性的影响 | 第41-42页 |
| 15 SphK1 vector和SphK1激动剂K6PC-5对高车前素促Caki-2和A498细胞凋亡作用的影响 | 第42-43页 |
| 16 SphK1 vector和激动剂K6PC-5对高车前素对细胞内cleaved caspase-3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平的影响 | 第43-45页 |
| 17 SphK1 vector和激动剂K6PC-5对高车前素抗迁移和侵袭能力的影响 | 第45-46页 |
| 18 高车前素的体内抗生长和转移活性 | 第46-48页 |
| 19 高车前素对肿瘤组织中SphK1活性的影响 | 第48页 |
| 20 免疫组化检测高车前素对肿瘤组织中Ki-67、Ceramide、Cleaved caspase-3、p-SphK1的表达影响,TUNLE检测细胞凋亡情况 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 综述 | 第66-92页 |
| 综述参考文献 | 第82-92页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第92-93页 |
| 缩略词表 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
