| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第17-23页 |
| 1 罗非鱼养殖现状 | 第17页 |
| 2 罗非鱼无乳链球菌病 | 第17-18页 |
| 2.1 无乳链球菌病病原及临床症状 | 第17页 |
| 2.2 流行病学情况 | 第17-18页 |
| 3 无乳链球菌诊断及检测方法 | 第18页 |
| 3.1 PCR检测方法 | 第18页 |
| 3.2 环介导等温扩增技术检测方法 | 第18页 |
| 3.3 重组酶聚合酶扩增技术 | 第18页 |
| 4 无乳链球菌的分子分型 | 第18-20页 |
| 4.1 分子血清型 | 第19页 |
| 4.2 MLVA和MLST技术 | 第19-20页 |
| 4.3 PFGE分型技术 | 第20页 |
| 4.4 毒力基因分型 | 第20页 |
| 5 耐药性研究 | 第20-21页 |
| 5.1 耐药谱型 | 第20-21页 |
| 5.2 耐药基因研究 | 第21页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 广东省罗非鱼源无乳链球菌分子流行病学研究 | 第23-54页 |
| 第一节 罗非鱼无乳链球菌检测方法的构建及2016年菌株的分离与鉴定 | 第23-42页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1 样品来源 | 第23页 |
| 1.2 试验试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-26页 |
| 2.1 罗非鱼无乳链球菌检测方法构建 | 第24-25页 |
| 2.2 病原菌的分离培养与纯化 | 第25-26页 |
| 2.3 病理分析 | 第26页 |
| 2.4 革兰氏染色 | 第26页 |
| 2.5 16 SrRNA分子鉴定 | 第26页 |
| 2.6 组织样品检测 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-40页 |
| 3.1 无乳链球菌检测方法的建立 | 第26-29页 |
| 3.2 病鱼症状及分离菌菌落形态观察 | 第29-30页 |
| 3.3 组织病理病变分析 | 第30-36页 |
| 3.4 革兰氏染色结果 | 第36页 |
| 3.5 分离菌16SrRNA分子鉴定 | 第36-37页 |
| 3.6 2016年20株无乳链球菌的分布区域 | 第37-39页 |
| 3.7 样品的三重PCR检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 无乳链球菌检测方法构建 | 第40-41页 |
| 4.2 病原菌的分离、鉴定及流行情况 | 第41-42页 |
| 第二节 广东省罗非鱼无乳链球菌分子分型研究 | 第42-54页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| 2.1 无乳链球菌基因组DNA提取 | 第43页 |
| 2.2 三组七重PCR检测无乳链球菌毒力基因 | 第43-45页 |
| 2.3 无乳链球菌分子血清型 | 第45-46页 |
| 2.4 MLST分型 | 第46页 |
| 2.5 MVLST分型 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-52页 |
| 3.1 无乳链球菌分子血清型与MLST分型结果 | 第46-47页 |
| 3.2 三组七重PCR检测无乳链球菌毒力基因 | 第47-48页 |
| 3.3 无乳链球菌多毒力位点基因分型(MVLST) | 第48-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 4.1 分子血清型和MLST分型分析 | 第52页 |
| 4.2 毒力基因谱 | 第52-53页 |
| 4.3 MVLST分型 | 第53-54页 |
| 第三章 广东省罗非鱼无乳链球菌耐药性研究 | 第54-70页 |
| 第一节 广东省罗非鱼无乳链球菌耐药谱及谱型聚类分析研究 | 第54-65页 |
| 1 材料 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-55页 |
| 2.1 药敏试验 | 第54-55页 |
| 2.2 耐药率和耐药谱分析 | 第55页 |
| 2.3 菌株耐药谱型的聚类分析 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-62页 |
| 3.1 无乳链球菌耐药率分析 | 第55-57页 |
| 3.2 无乳链球菌耐药谱型 | 第57-60页 |
| 3.3 无乳链球菌耐药谱聚类分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.1 无乳链球菌耐药情况 | 第62页 |
| 4.2 无乳链球菌耐药谱与来源相关性分析 | 第62-63页 |
| 4.3 无乳链球菌谱型聚类分析 | 第63页 |
| 4.4 耐药谱分型与多毒力位点序列分型(MVLST)的相关性分析 | 第63-65页 |
| 第二节 广东省罗非鱼无乳链球菌耐药基因检测 | 第65-70页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-67页 |
| 2.1 最小抑菌浓度(MIC) | 第65-66页 |
| 2.2 引物设计与合成 | 第66页 |
| 2.3 耐药基因检测 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-68页 |
| 3.1 菌株对环丙沙星的MIC值 | 第67页 |
| 3.2 gyrA和parC基因扩增 | 第67页 |
| 3.3 磺胺类耐药基因和整合酶基因intI1和intI2扩增 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 4.1 微量稀释法测定无乳链球菌对环丙沙星的敏感性 | 第68页 |
| 4.2 耐药基因扩增 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录一 无乳链球菌菌株的具体信息 | 第80-82页 |
| 附录二 多毒力位点序列分型与耐药谱型结果 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第84页 |
